酵母雙（單）雜交cDNA文庫(kù)構(gòu)建

1. 服務(wù)流程

1.1 客戶樣品QC

1.2 Total RNA的提取。

1.3 mRNA的分離。

1.4 以mRNA為模板進(jìn)行cDNA雙鏈的合成。

1.5 對(duì)合成的cDNA雙鏈進(jìn)行分級(jí)純化。

1.6 將分級(jí)純化的cDNA與pDONR222載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

1.7 將重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞。

1.8 cDNA文庫(kù)的QC。

a) 檢測(cè)文庫(kù)庫(kù)容量。

b)隨機(jī)挑取32個(gè)克隆子,PCR檢測(cè)平均插入片段大小,陽(yáng)性率。

1.9 初級(jí)文庫(kù)鋪板,抽提質(zhì)粒

1.10 初級(jí)文庫(kù)質(zhì)粒與PDEST22(或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定

載體,根據(jù)客戶需求確定載體)載體進(jìn)行重組反應(yīng),電轉(zhuǎn)化,檢測(cè)文庫(kù)質(zhì)量。

a) 檢測(cè)文庫(kù)庫(kù)容量。

b)每個(gè)文庫(kù)隨機(jī)挑取32個(gè)克隆子,PCR檢測(cè)平均插入片段大小,陽(yáng)性率。

2.送樣要求

2.1 針對(duì)每個(gè)文庫(kù),客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本,或者至少500ug總RNA。

3.發(fā)貨內(nèi)容

3.1 我們提供構(gòu)建好的酵母文庫(kù)的甘油菌液(含20%甘油的LB培養(yǎng)基),擴(kuò)增后初級(jí)文庫(kù)甘油菌,初級(jí)

文庫(kù)中抽質(zhì)粒,隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜,文庫(kù)構(gòu)建報(bào)告,酵母雙雜交篩選相關(guān)細(xì)胞和質(zhì)粒。

4.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

4.1 文庫(kù)庫(kù)容量:大于1*10^7 CFU。

4.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。

4.3 陽(yáng)性率:大于95%。

5.服務(wù)時(shí)間

30個(gè)工作日內(nèi)