海星生物是一家以基因編輯技術(shù)和細(xì)胞生物技術(shù)的研發(fā)型科技公司,主營業(yè)務(wù)是細(xì)胞基因編輯相關(guān)的產(chǎn)品研發(fā)與技術(shù)服務(wù),主要為臨床研究、細(xì)胞基因功能研究、基因診斷的企業(yè)和學(xué)術(shù)研究機(jī)構(gòu)提供技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。
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Cas9-Cell Line Gene Knock-Out service(CGKO)基因敲除細(xì)胞系服務(wù)是針對各種常用的細(xì)胞系,進(jìn)行基因片段敲除的技術(shù)服務(wù)。主要提供:Cas9介導(dǎo)的大片段基因敲除(非移碼)的方式導(dǎo)致細(xì)胞基因功能缺失,基因敲除可以將基因功能完全消除,比RNA干擾獲得的數(shù)據(jù)更加確定,沒有RNA干擾殘留的基因功能背景的干擾,目前越來越成為主流的基因功能研究方式。使用Cas9X可以讓你輕松靶向更高分的文章!
使用Cas9的進(jìn)行細(xì)胞系基因敲除的過程中發(fā)現(xiàn):不同的位點(diǎn)不同的細(xì)胞系的效率差異很大,原因包括:不同的細(xì)胞株的基因拷貝數(shù)的差異很大(很多細(xì)胞系并非二倍體,而是混雜的多倍體),很多細(xì)胞的基因存在基因切割位點(diǎn)突變的問題(導(dǎo)致按照生物基因庫設(shè)計(jì)的gRNA無法發(fā)揮作用),還有細(xì)胞無法獲得單克隆,這些都是目前進(jìn)行基因敲除的困難所在。
| Cas9X使用新的實(shí)驗(yàn)?zāi)P蛯⒓?xì)胞系的敲除效率進(jìn)行大幅的提升
1. 使用Cas9蛋白和gRNA的復(fù)合物直接進(jìn)行電轉(zhuǎn),提高效率的同時(shí)減少非特異的切割;(目前報(bào)道脫靶率最低的方法)
2. 使用高效的電轉(zhuǎn)設(shè)備,具備更高的電轉(zhuǎn)效率和細(xì)胞存活率;
3. 使用更先進(jìn)的單克隆稀釋設(shè)備和方法,大幅提高陽性率;(提高2倍)
4. 持續(xù)建庫:我們也將提供更多的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株和基因編輯細(xì)胞株產(chǎn)品供科研工作者選擇。
5. 大片段敲除,可以通過PCR快速鑒定;
6. 非移碼方式敲除,可以保證細(xì)胞系做基因回補(bǔ)無需考慮突變修飾的問題。
通過優(yōu)化,Cas9X在細(xì)胞系基因敲除的效率是傳統(tǒng)質(zhì)粒法的數(shù)倍(3-5倍)結(jié)合ClonePlus技術(shù),可以將效率提升10-15倍,也可以針對很多之前難以實(shí)現(xiàn)敲除的細(xì)胞株進(jìn)行基因敲除操作,而且周期比病毒法更短。最快可以5周內(nèi)拿到基因敲除的細(xì)胞!
| 技術(shù)原理圖
| 技術(shù)流程圖
| 細(xì)胞工作流程
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