細(xì)胞支原體檢測(cè)服務(wù)

|  支原體污染的危害

支原體是實(shí)驗(yàn)室中常見的污染細(xì)胞的原核生物，據(jù)統(tǒng)計(jì)約有15%-35%的細(xì)胞被支原體污染。支原體會(huì)改變宿主細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能等一系列特征，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不正確；干擾細(xì)胞代謝和生長(zhǎng)，改變核酸合成，影響細(xì)胞抗原性，導(dǎo)致染色體改變，干擾病毒復(fù)制以及模仿病毒的作用。因此，每一株外來(lái)細(xì)胞在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前，都應(yīng)進(jìn)行支原體檢測(cè)，并且應(yīng)對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞定期（如每2-3個(gè)月）進(jìn)行支原體檢測(cè)。

建立定期的監(jiān)控方案，有助于提高科研效率，在污染發(fā)生在早期時(shí)及時(shí)處理�？杀苊庵г�體污染造成更大的損失！

體外培養(yǎng)環(huán)境中，細(xì)胞自身沒(méi)有抗污染的能力，即使培養(yǎng)基會(huì)添加抗生素，抵抗污染的能力也很有限。常見的微生物污染為細(xì)菌、真菌、支原體和病毒等，其中又以支原體污染最為普遍棘手。一旦污染了支原體的細(xì)胞將無(wú)法正常形成單克隆，而且細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程容易死亡，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)效率極低。為了維持實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定，必須對(duì)所有的實(shí)驗(yàn)使用到的細(xì)胞進(jìn)行支原體的檢測(cè)。

支原體污染后，細(xì)胞不會(huì)有明顯的死亡現(xiàn)象，且支原體通常能與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，培養(yǎng)體系亦無(wú)渾濁現(xiàn)象，然而實(shí)際上卻可能存在細(xì)胞形變，DNA合成受抑制等諸多問(wèn)題，并且即使發(fā)現(xiàn)支原體污染也較難徹底清除，因此確保細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)初期無(wú)微生物污染是至關(guān)重要的。
采用PCR法對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)菌、真菌和支原體等檢測(cè)。以微生物16（18）SrRNA基因?yàn)榘谢�因，設(shè)計(jì)通用引物并建立PCR擴(kuò)增體系。

如常用的兩個(gè)針對(duì)16S rRNA基因的通用引物對(duì)為27F, 1492R和63F, 1387R。
27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；1492R：5'-TACCTTGTTACGACTT-3'
63F：5’-CAGGCCTAACACATGCAAGTC-3’；1387R：5’-GGGCGGTGTACAAGGC-3’

圖1  細(xì)胞樣品為PCR陽(yáng)性，將PCR產(chǎn)物送測(cè)序，經(jīng)BLAST比對(duì)為牛支原體

研究調(diào)查表明，約有20多種支原體能污染細(xì)胞（尤其是傳代細(xì)胞），95%以上是牛源性，常見為口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.Hyorhinis）和菜氏無(wú)膽甾原體（A.laidlawii）。

通用的快速基因診斷技術(shù)，經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，能保證所選引物具有良好的保守性和特異性，重復(fù)性好且操作簡(jiǎn)單，相較于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法，能有效地縮短實(shí)驗(yàn)周期至3天，達(dá)到快速反饋檢測(cè)結(jié)果的目的。

|  成功案例