質(zhì)粒載體網(wǎng)NCI-N87[N87]人胃癌細(xì)胞

細(xì)胞名稱NCI-N87[N87]（人胃癌細(xì)胞）

種屬人

年齡（性別）男

組織來源胃癌

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述NCI-N87細(xì)胞表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG72，并且沒有左旋多巴胺脫羧酶(DDC)活性。NCI-N87細(xì)胞的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體，它們表達(dá)蕈毒堿膽堿受體。沒有證據(jù)表明，NCI-N87細(xì)胞存在N-myc、L-myc、myb和EGF受體基因的重組。NCI-N87細(xì)胞表達(dá)的c-myc和c-erb-B2 RNA水平與其它細(xì)胞株相當(dāng)。以下基因NCI-N87細(xì)胞不表達(dá)：N-myc、L-myc、c-cis、IGF-2或胃泌激素釋放肽。據(jù)報(bào)道，NCI-N87細(xì)胞的植板率為4.3%。

生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

NCI-N87[N87]人胃癌細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙，酮酸鈉0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）NCI-N87[N87]人胃癌細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

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