服務(wù)概述:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)。利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)檢測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析方法。在PCR反應(yīng)體系中,加入過量的 SYBR Green 熒光染料,SYBR Green熒光染料特異性的摻入DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染 料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。
技術(shù)要點(diǎn):
1、實(shí)驗(yàn)過程包括樣品DNA或RNA的提取,特異性引物設(shè)計(jì)和合成。
2、在PCR操作過程中,異源核酸的污染常會(huì)造成非特異的結(jié)果。
應(yīng)用:
1、低通量的基因差異表達(dá)檢測(cè)
2、驗(yàn)證核酸芯片結(jié)果
3、樣品中基因拷貝數(shù)的確定
樣品要求:
1、組織:200-400mg
2、細(xì)胞:約107細(xì)胞
3、mRNA:200-400ng
引物:
1、提供引物:引物長(zhǎng)度在18-25mer,G、C含量在30-70%,退火溫度在55-62℃。目標(biāo)片斷一般以100-200bp為佳。
2、我們可以向您免費(fèi)提供引物和TaqMan探針設(shè)計(jì)服務(wù)。
標(biāo)準(zhǔn)品:
要確定準(zhǔn)確的靶序列數(shù)量,需要有準(zhǔn)確定量的靶序列作為參照,最好是以質(zhì)粒的形式提供。
完成時(shí)間:
二十五個(gè)工作日。
結(jié)果報(bào)告內(nèi)容:
Ct值。如果有標(biāo)準(zhǔn)品可提供樣品單位質(zhì)量中的靶序列拷貝數(shù)。
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