cDNA文庫構建

服務概述：
我們擁有豐富的建庫經驗和成熟的實驗方法，在cDNA合成、消化、連接及轉化等方面擁有成熟的技術，建成的文庫全長cDNA比例高，可用于大規(guī)�；�因測序和目的基因的篩選。

cDNA文庫構建原理和材料說明：
本制品是根據美國Stratagene公司的cDNA說明書，并采用Stratagene公司的配套試劑盒，使用的材料為用戶提供的新鮮植物(動物)組織材料，制作而成的文庫。在制作文庫時，以帶有XhoI酶切位點的oligo(dT)Linker Primer為反轉錄引物，再在雙鏈cDNA片段的5’端加EcoRI adaptor, 然后酶切、過柱去除小片段后克隆到ZAP表達載體中，用Gigapack III Gold 包裝蛋白進行包裝。外源基因在噬菌體中可得到表達，該cDNA文庫可以用抗體來篩選基因；同時，噬菌體又可以轉化為質粒，直接用于測序等分子生物學操作。

技術要點：
1、Total RNA抽提及mRNA純化是最關鍵的第一步，必須保證mRNA的完整性。
2、 cDNA第一鏈長度太短或產量太低是克隆cDNA的常見問題。我們擁有專業(yè)的實驗人員，能保證建成的文庫cDNA全長比例高，平均長度≥1kb。
3、連接效率直接影響著cDNA文庫質量，我們能保證連接效率。

樣品要求：
材料要求新鮮、RNA不能降解；所需要的最低的mRNA為10-12g。

完成時間：
材料送到起45天內完成。對于有些RNA提取困難的材料或樣品材料本身質量問題，時間要長一些，會在1周內和客戶協(xié)商約定時間。

結果報告內容：
1、 產物電泳圖譜。
2、 初始庫，保存在-20℃。
3、 文庫評價的數據，包括庫容量，滴度，插入片段的平均長度，重組效率。
庫容量：初始基因文庫的滴度在1 ×106 以上；如果需要擴增，保證擴增后滴度在109 左右，容量大于1 ×105，平均長度大于1kb，重組效率大于90%。