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基因敲除小鼠構(gòu)建技術(shù)服務(wù) 基因敲除小鼠模型建立技術(shù)服務(wù) 基因敲除小鼠價(jià)格優(yōu)惠
基因敲除小鼠利用基因打靶技術(shù)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的程序一般為:(1) 構(gòu)建基因打靶載體; (2) 將基因打靶載體通過(guò)一定的方式(常用電穿孔法) 導(dǎo)入同源的胚胎干細(xì)胞中,使外源DNA 與胚胎干細(xì)胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組,將打靶載體中的DNA 序列整合到內(nèi)源基因組中從而得以表達(dá); (3) 篩選發(fā)生同源重組的陽(yáng)性克隆,通過(guò)顯微注射或者胚胎凝集的方法將經(jīng)過(guò)遺傳修飾的ES細(xì)胞引入受體胚胎內(nèi)制作嵌合體小鼠,在生物活體中研究特定基因的功能;蚯贸∈笫沟醚芯空邆兡軌蛴^察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改變,從而推斷出特定基因的作用。
基因敲除小鼠第二步,從灰色小鼠胚泡中分離胚胎干細(xì)胞,在體外進(jìn)行培養(yǎng)。
基因敲除小鼠第三步,用同源重組載體轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞,用含有新霉素和更昔韋洛的培養(yǎng)基篩選發(fā)生了同源重組的細(xì)胞。
基因敲除小鼠第四步,將篩選得到的胚胎干細(xì)胞植入白色小鼠的早期胚胎(胚泡時(shí)期)中。
基因敲除小鼠第五步,將上述胚胎植入假孕母鼠(白色)子宮中。
基因敲除小鼠第六步,在母鼠所產(chǎn)的小鼠中,有一些是正常的白色,另一些則是嵌合體灰白相間的小鼠。這些嵌合體小鼠的細(xì)胞一部分起源于白色皮毛的胚泡細(xì)胞,另一部分則起源于重組的胚胎干細(xì)胞。起源于重組胚胎干細(xì)胞的皮毛顯示出灰色斑塊,很好辨認(rèn)。
基因敲除小鼠第七步,嵌合體小鼠與野生型白色小鼠進(jìn)行雜交,如果嵌合體小鼠的生殖細(xì)胞恰好是起源于重組胚胎干細(xì)胞,那么其子代小鼠就都應(yīng)該呈現(xiàn)灰色。而這些灰色小鼠的所有細(xì)胞都是雜合體。
基因敲除小鼠第八步,雜合體灰色小鼠(+/H)之間進(jìn)行雜交,得到灰色和白色的子代。從灰色子代中篩選出純合小鼠(H/H),其一對(duì)同源染色體上的等位基因都失活,此純合小鼠即為 “基因敲除小鼠構(gòu)建”。
我們有開發(fā)的基因敲除小鼠構(gòu)建APOE(動(dòng)脈硬化研究),
基因敲除小鼠PEPT(白內(nèi)障研究)
Shh+/- 基因敲除小鼠構(gòu)建等小鼠: Shh(Sonic hedgehog)基因在脊椎動(dòng)物胚胎組織形成中起著重要的作用,包括大腦、脊椎、中軸骨骼和四肢的形成。基因缺失的胚胎早期可以觀察到中間結(jié)構(gòu)如脊索和地板的形成和維持的影響,晚期可以觀察到遠(yuǎn)肢結(jié)構(gòu)的缺失以及獨(dú)眼,腹部細(xì)胞包括神經(jīng)管的缺失、脊柱和許多肋骨的缺失;蚯贸∈骃hh蛋白被證實(shí)是脊椎動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中組織形成所必須的胞外信號(hào)。
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