代謝組學(xué)技術(shù)服務(wù)UPLC------Q-TOF LC/MS

                    代謝組學(xué)服務(wù)UPLC­­­---Q-TOF LC/MS 
 
聲明： 為保護客戶的權(quán)益與保密協(xié)議，在保證實驗結(jié)果真實有效的前提下，我們對實驗的數(shù)據(jù)進行了適當(dāng)?shù)淖儎犹幚恚�簡化了實驗流程及采樣�?shù)量。請勿轉(zhuǎn)載！責(zé)任自負！
 
使用儀器：液-質(zhì)聯(lián)用
UPLC­-----Agilent 1290
Q-TOF LC/MS------Thermo Orbitrap Elite(分辨率> 240,000 FWHM)或Thermo  QE
 
樣品信息：
患病組血清樣品vs.對照組血清樣品
 
實驗流程：
通過UPLC­­­----Q-TOF LC/MS分析，分析患病組和對照組血清樣品代謝成分，獲得代謝組分的實驗數(shù)據(jù)。利用數(shù)學(xué)分析方法尋找患病組和對照組中具有差異性的代謝組分，建立未知樣本分析模型。
 
實驗步驟：
 

一、采樣
對樣本來源進行分組，并記錄性別、年齡、病情、治療等信息；
采集全血，離心后獲得血漿/清樣本，于-80℃冰箱中保存。

血漿/清樣本用提取液（甲醇-乙腈）沉淀蛋白，并于-20℃下提取化合物1 h；高速離心后取上清液，經(jīng)真空抽干后復(fù)溶于甲醇溶液。


二、儀器分析及數(shù)據(jù)預(yù)處理（信息峰的提取和識別）


圖一  人血清樣品典型的LC／MS總離子流圖(TIC, ESI+，m/z 60–1000.)



三、數(shù)據(jù)分析

 
圖二：主成分（ PCA ）得分圖： 每個點代表一個樣本，對照組和患病組樣本在 CA 空間 可以明顯的分為兩組


  
圖三：   偏最小二乘法判別分析 （ 3D PLS-DA ， S-Plot ），尋找 候選生物標(biāo)志物，可用 于 疾病診斷和模型識別



四、差異代謝物鑒定

圖四： 高分辨率 MS/MS 鑒定，右圖是左圖（一級質(zhì)譜結(jié)果）單峰的二級質(zhì)譜結(jié)果

 


另：生物信息學(xué)服務(wù)內(nèi)容：后期數(shù)據(jù)分析及挖掘
 
 A 、疾病識別，診斷模型
 
 B 、系統(tǒng)生物學(xué)分析

圖五： 疾病潛在生物標(biāo)志物的代謝通路分析，闡釋發(fā)病機制和生命現(xiàn)象