1、RT-PCR獲取目的基因,并構(gòu)建到目的載體上;
2、半定量RT-PCR;
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服務內(nèi)容:
1、RT-PCR獲取目的基因,并構(gòu)建到目的載體上; 2、半定量RT-PCR;
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具體操作:
一、RT-PCR擴增目的基因:
1、提取目的細胞或組織的總RNA,并將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA;
2、采用普通PCR擴增得到目的基因(對于片段較長或在細胞中表達量較低的基因,采用巢式PCR進行擴增);
3、將目的基因克隆到T載體上,并進行測序鑒定(如客戶需要克隆到其他載體上,需要提供載體,可直接將目的基因克隆到相應載體上);
二、半定量RT-PCR(一般用于目的基因表達改變的檢測):
1、提取目的細胞或組織的總RNA,并將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA;
2、采用普通PCR擴增內(nèi)參(b-actin或GAPDH),調(diào)整擴增循環(huán)數(shù),使其處于對數(shù)擴增期;調(diào)整內(nèi)參,使其保持一致;
3、普通PCR擴增目的基因,并通過圖像分析軟件分析目的基因與內(nèi)參表達量的比例;
4、統(tǒng)計分析;
服務價格:
詢價。