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利用 Agilent 2100 生物分析儀系統(tǒng)簡(jiǎn)化 DV200 評(píng)估

瀏覽次數(shù):14630 發(fā)布日期:2019-6-24  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
作者
Eva Graf
安捷倫科技有限公司
Waldbronn, Germany

前言
RNA 樣本的質(zhì)量評(píng)估對(duì)于成功完成 RNA 測(cè)序工作流程中的文庫(kù)制備至關(guān)重要。Agilent 2100 生物分析儀系統(tǒng)能夠通過(guò)總 RNA Nano 和 Pico 分析實(shí)現(xiàn) RNA 樣本量和完整性的高重現(xiàn)性評(píng)估。一般來(lái)講,RNA 完整值 (RIN) 是一種適用于評(píng)價(jià) RNA 測(cè)序樣本完整性的參數(shù)。建立源自福爾馬林固定石蠟包埋 (FFPE) 組織樣本的 RNA 測(cè)序方法時(shí),需要通過(guò)片段大小分布來(lái)進(jìn)一步區(qū)分降解的 RNA 樣本。DV200 質(zhì)量指標(biāo)表示超過(guò)200個(gè)核苷酸的 RNA 片段的百分比,并且與FFPE樣本的捕獲前文庫(kù)產(chǎn)率表現(xiàn)出高度關(guān)聯(lián)性[1]。

本技術(shù)概述介紹了在 Agilent 2100 生物分析儀系統(tǒng)上使用 DV200 RNA Nano和 DV200 RNA Pico 分析簡(jiǎn)化 DV200 的評(píng)估。

DV200 RNA Nano和Pico分析的主要改進(jìn)點(diǎn):
•  預(yù)定義的 DV200 區(qū)域
•  DV200 默認(rèn)展示在區(qū)域表中
•  結(jié)果根據(jù) DV200 范圍進(jìn)行標(biāo)記
•  DV200 范圍顯示在芯片匯總中

技術(shù)詳情
使用 Agilent 2100 生物分析儀系統(tǒng), 該系統(tǒng)配備 Agilent 2100 Expert 軟件版本 B.02.08、Agilent RNA 6000 Nano 試劑盒(部件號(hào) 5067-1511) 和 Agilent RNA 6000 Pico 試劑盒(部件號(hào) 5067-1513)。除非另有說(shuō)明, 否則按照制造商的方案和指南進(jìn)行操作。FFPE RNA 樣本由國(guó)家腫瘤疾病中心(NCT,德國(guó)海德堡)的組織庫(kù)提供,本應(yīng)用符合組織庫(kù)的規(guī)定并獲得海德堡大學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

數(shù)據(jù)分析
DV200 RNA 分析能夠自動(dòng)定義一個(gè)包含 200 至 8000 個(gè)核苷酸的區(qū)域, 如圖 1 所示。對(duì)應(yīng)的 DV200 顯示在區(qū)域表的總百分比一列中。所有樣本的 RIN 算法不受影響。選擇結(jié)果表,DV200 會(huì)包含在導(dǎo)出并打印的數(shù)據(jù)中。此外,可以從芯片匯總表中復(fù)制 DV200 范圍。



結(jié)果標(biāo)記

可根據(jù) DV200 指標(biāo)對(duì)降解的 RNA 樣本按片段大小分布進(jìn)行分類(lèi)。一些 RNA 序列庫(kù)方案推薦根據(jù)樣本的 DV200 范圍確定 RNA 的起始量[1]。DV200RNA 分析用不同顏色標(biāo)記 RIN < 4 的樣本,以輕松評(píng)估 DV200 范圍(圖 2)。



導(dǎo)入分析
DV200 RNA Nano 和 Pico 分析能夠與 2100 Expert 軟件版本 B.02.08 或更高版本兼容。它們可用于重新分析現(xiàn)有數(shù)據(jù)文件以及新數(shù)據(jù)采集。
如需使用 2100 Expert 軟件進(jìn)行 DV200 RNA Nano 或 Pico 分析,請(qǐng)從安捷倫網(wǎng)站下載該軟件:www.genomics.agilent.com。將 DV200 RNA Nano.xsy 或 DV200 RNA Pico.xsy 文件存儲(chǔ)在 RNA 分析文件夾 (C:\Program Files (x86)\Agilent\2100 bioanalyzer\2100expert\assays\RNA) 中。

要將 DV200 應(yīng)用于現(xiàn)有數(shù)據(jù)文件:
1. 用 2100 Expert 軟件打開(kāi)文件
2. 導(dǎo)航至分析屬性選項(xiàng)卡
3. 單擊導(dǎo)入設(shè)定值并選擇對(duì)應(yīng)的 .xsy文件(圖 3)


DV200 RNA Nano 分析僅可用于重新分析真核細(xì)胞總 RNA Nano 數(shù)據(jù)文件,并且 DV200 RNA Pico 分析僅可用于真核細(xì)胞總 RNA Pico 數(shù)據(jù)文件。

分析設(shè)定值和結(jié)果標(biāo)記將應(yīng)用于數(shù)據(jù)文件并且隨后可以進(jìn)行保存。

要用 DV200 RNA Nano 和 DV200 RNA Pico 分析運(yùn)行樣本:
1. 根據(jù) RNA Nano 或 Pico 試劑盒指南制備樣本和 RNA 芯片
2. 當(dāng)芯片準(zhǔn)備好并放入 2100 生物分析儀中時(shí),轉(zhuǎn)至儀器情境界面,單擊分析選擇,并選擇對(duì)應(yīng)的 DV200 RNA 分析。將該分析存儲(chǔ)于 RNA 分析文件夾中后,就成為了通用分析選擇的組成部分(圖 4)



結(jié)論
DV200 RNA Nano 和 DV200 RNA Pico 分析是實(shí)用工具,能夠自動(dòng)定義從 FFPE 組織中提取的降解 RNA 樣本的 DV200 區(qū)域。分析被導(dǎo)入后,即可用于運(yùn)行 Agilent 2100 生物分析儀 RNA 芯片或重新分析現(xiàn)有數(shù)據(jù)文件。DV200 結(jié)果可保存、導(dǎo)出并顯示在報(bào)告中。

參考文獻(xiàn)
1. Evaluating RNA Quality from FFPE Samples. Illumina, Technical Note, publication number 470-2014 001. https://www.illumina.com/ documents/products/technotes/ technote-truseq-rna-access.pdf

僅限研究使用。
不可用于診斷目的。
本文中的信息、說(shuō)明和指標(biāo)如有變更,恕不另行通知。
© 安捷倫科技(中國(guó))有限公司,2017 2017 年 8 月 1 日,中國(guó)出版
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來(lái)源:安捷倫科技(中國(guó))有限公司(Genomics)
聯(lián)系電話:800 820 3278,400 820 3278,010-64397888
E-mail:inquire-china_lsca@agilent.com

標(biāo)簽: 生物分析儀
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