系統(tǒng)能夠通過(guò)總 RNA Nano 和 Pico 分析實(shí)現(xiàn) RNA 樣本量和完整性的高重現(xiàn)性評(píng)估。一般來(lái)講,RNA 完整值 (RIN) 是一種適用于評(píng)價(jià) RNA 測(cè)序樣本完整性的參數(shù)。建立源自福爾馬林固定石蠟包埋 (FFPE) 組織樣本的 RNA 測(cè)序方法時(shí),需要通過(guò)片段大小分布來(lái)進(jìn)一步區(qū)分降解的 RNA 樣本。DV
質(zhì)量指標(biāo)表示超過(guò)200個(gè)核苷酸的 RNA 片段的百分比,并且與FFPE樣本的捕獲前文庫(kù)產(chǎn)率表現(xiàn)出高度關(guān)聯(lián)性
技術(shù)詳情
使用
Agilent 2100 生物分析儀系統(tǒng), 該系統(tǒng)配備 Agilent 2100 Expert 軟件版本 B.02.08、Agilent RNA 6000 Nano 試劑盒(部件號(hào) 5067-1511) 和 Agilent RNA 6000 Pico 試劑盒(部件號(hào) 5067-1513)。除非另有說(shuō)明, 否則按照制造商的方案和指南進(jìn)行操作。FFPE RNA 樣本由國(guó)家腫瘤疾病中心(NCT,德國(guó)海德堡)的組織庫(kù)提供,本應(yīng)用符合組織庫(kù)的規(guī)定并獲得海德堡大學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。
數(shù)據(jù)分析
DV
200 RNA 分析能夠自動(dòng)定義一個(gè)包含 200 至 8000 個(gè)核苷酸的區(qū)域, 如圖 1 所示。對(duì)應(yīng)的 DV
200 顯示在區(qū)域表的
總百分比一列中。所有樣本的 RIN 算法不受影響。選擇結(jié)果表,DV
200 會(huì)包含在導(dǎo)出并打印的數(shù)據(jù)中。此外,可以從芯片匯總表中復(fù)制 DV
200 范圍。
結(jié)果標(biāo)記
可根據(jù) DV
200 指標(biāo)對(duì)降解的 RNA 樣本按片段大小分布進(jìn)行分類(lèi)。一些 RNA 序列庫(kù)方案推薦根據(jù)樣本的 DV
200 范圍確定 RNA 的起始量
[1]。DV
200RNA 分析用不同顏色標(biāo)記 RIN < 4 的樣本,以輕松評(píng)估 DV
200 范圍(圖 2)。
導(dǎo)入分析
DV
200 RNA Nano 和 Pico 分析能夠與 2100 Expert 軟件版本 B.02.08 或更高版本兼容。它們可用于重新分析現(xiàn)有數(shù)據(jù)文件以及新數(shù)據(jù)采集。
如需使用 2100 Expert 軟件進(jìn)行 DV
200 RNA Nano 或 Pico 分析,請(qǐng)從安捷倫網(wǎng)站下載該軟件:
www.genomics.agilent.com。將 DV
200 RNA Nano.xsy 或 DV
200 RNA Pico.xsy 文件存儲(chǔ)在 RNA 分析文件夾 (C:\Program Files (x86)\Agilent\2100 bioanalyzer\2100expert\assays\RNA) 中。
要將 DV
200 應(yīng)用于現(xiàn)有數(shù)據(jù)文件:
1. 用 2100 Expert 軟件打開(kāi)文件
2. 導(dǎo)航至分析屬性選項(xiàng)卡
3. 單擊導(dǎo)入設(shè)定值并選擇對(duì)應(yīng)的 .xsy文件(圖 3)
DV
200 RNA Nano 分析僅可用于重新分析真核細(xì)胞總 RNA Nano 數(shù)據(jù)文件,并且 DV
200 RNA Pico 分析僅可用于真核細(xì)胞總 RNA Pico 數(shù)據(jù)文件。
分析設(shè)定值和結(jié)果標(biāo)記將應(yīng)用于數(shù)據(jù)文件并且隨后可以進(jìn)行保存。
要用 DV
200 RNA Nano 和 DV
200 RNA Pico 分析運(yùn)行樣本:
1. 根據(jù) RNA Nano 或 Pico 試劑盒指南制備樣本和 RNA 芯片
2. 當(dāng)芯片準(zhǔn)備好并放入 2100 生物分析儀中時(shí),轉(zhuǎn)至儀器情境界面,單擊分析選擇,并選擇對(duì)應(yīng)的 DV200 RNA 分析。將該分析存儲(chǔ)于 RNA 分析文件夾中后,就成為了通用分析選擇的組成部分(圖 4)
結(jié)論
DV
200 RNA Nano 和 DV
200 RNA Pico 分析是實(shí)用工具,能夠自動(dòng)定義從 FFPE 組織中提取的降解 RNA 樣本的 DV
200 區(qū)域。分析被導(dǎo)入后,即可用于運(yùn)行
Agilent 2100 生物分析儀 RNA 芯片或重新分析現(xiàn)有數(shù)據(jù)文件。DV
200 結(jié)果可保存、導(dǎo)出并顯示在報(bào)告中。
參考文獻(xiàn)
1. Evaluating RNA Quality from FFPE Samples. Illumina, Technical Note, publication number 470-2014 001. https://www.illumina.com/ documents/products/technotes/ technote-truseq-rna-access.pdf
僅限研究使用。
不可用于診斷目的。
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© 安捷倫科技(中國(guó))有限公司,2017 2017 年 8 月 1 日,中國(guó)出版
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