microRNA技術(shù)服務(wù)

具體請(qǐng)參照： 

microRNA   過表達(dá)載體 

A. 優(yōu)點(diǎn):
MiRNA 熒光素酶報(bào)告載體具有以下優(yōu)點(diǎn):
· 功能性檢測(cè)：是一種功能性的分析方法，用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)miRNA介導(dǎo)的靶基因的調(diào)控
· 可定量分析： miRNAs介導(dǎo)的調(diào)控可以通過熒光素酶基因的表達(dá)進(jìn)行定量監(jiān)測(cè)
· 可構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系–載體可用于構(gòu)建表達(dá)報(bào)告基因的穩(wěn)定細(xì)胞系.
B. 原理：
pLuc-3UTR報(bào)告載體是一系列基于熒光素酶報(bào)告的構(gòu)建體，用于監(jiān)測(cè)miRNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)靶基因調(diào)控。每個(gè)載體含有CMV啟動(dòng)子、熒光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40終止子序列。MiRNA的表達(dá)并與3 ' UTR結(jié)合，導(dǎo)致熒光素酶基因表達(dá)的抑制。因此miRNA介導(dǎo)的特異靶的調(diào)控可通過熒光素酶活*進(jìn)行監(jiān)測(cè)。比較二個(gè)樣本熒光素酶活性可解析調(diào)控，明確差異。

詳細(xì)請(qǐng)參考  

microRNA  慢病毒包裝系統(tǒng)具體講參照：《ViraPowerTM Packaging Mix pLenti expression plasmid  DNA》   (Invitrogen)

詳細(xì)參照： 

4.     microRNA  實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real Time PCR，qRT-PCR）避免了傳統(tǒng)PCR 以終產(chǎn)物檢測(cè)定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。與常規(guī)PCR 相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR 污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，已成為國(guó)際公認(rèn)的核酸分子定量的標(biāo)準(zhǔn)方法。該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA 表達(dá)量的變化；比較不同
組織的mRNA 表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA 干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。它涉及到DNA或RNA 樣品制備，反轉(zhuǎn)錄及PCR 反應(yīng)等一系列重要的分子生物學(xué)過程。

配套產(chǎn)品：qPCR實(shí)時(shí)熒光定量一步法試劑盒  BK2100BK   BK2100   

 設(shè)計(jì)目的片段和內(nèi)參基因的qPCR 引物：利用Primer5.0 等軟件設(shè)計(jì)PCR 引物
及探針。我們公司免費(fèi)為客戶設(shè)計(jì)引物和探針。 

詳細(xì)參照：     

5. microRNA 特異引物（部分產(chǎn)品有現(xiàn)貨，具體見microRNA 產(chǎn)品說明）

microRNA(miRNA)是一類有大約22 個(gè)核苷酸組成的非編碼小分子RNA，其廣泛存在于真核
生物中。miRNA 在個(gè)體發(fā)育的不同時(shí)期及不同組織中有不同的表達(dá)模式，都表明了其在發(fā)育
和分化中起有重大的調(diào)控作用。迄今為此，對(duì)miRNA 的檢測(cè)方法主要有Northern Blot 等基
于分子雜交的方法，這些方法敏感度低、耗時(shí)長(zhǎng)、RNA 的用量較大。miRNA Q-PCR Detection
Kit 采用了國(guó)際上公認(rèn)的核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)――Real-Time PCR 技術(shù)來對(duì)miRNA 進(jìn)行檢測(cè)，
其具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。 

EzOmicsTM miRNA qPCR Detection Primer Set包含了miRNA特異的逆轉(zhuǎn)錄引物，以及qPCR正、
反向引物套裝。其中莖凸環(huán)結(jié)構(gòu)狀的miRNA特異逆轉(zhuǎn)錄引物可特異性的轉(zhuǎn)錄成熟的miRNA。再利
用高度特異的正反向引物，使miRNA定量即靈敏又高度特異。EzOmicsTM miRNA qPCR Detection Primer Set 提供了一種最低能檢測(cè)到5 個(gè)拷貝目標(biāo)miRNA 的高靈敏度的檢測(cè)方法，并且具有一個(gè)7 個(gè)數(shù)量級(jí)
的動(dòng)態(tài)變化范圍，反應(yīng)的模板可以是總RNA 或者已純化的小RNA 等。 

 配套產(chǎn)品：miRNA  引物檢測(cè)試劑盒 BK1010  4OO元