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生物研發(fā)服務(wù)

高效液相色譜法檢測黃曲霉毒素M1操作規(guī)程

作為國內(nèi)專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商之一，近年來泰樂祺檢測應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測技術(shù)問題，以期望快速提出解決方案。

服務(wù)類別：	其他生物研發(fā)	總訪問：	7219
最后更新：	2021-10-14	半年訪問：	123
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泰樂祺科技－高效液相色譜法檢測黃曲霉毒素M1操作規(guī)程

作為國內(nèi)專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商之一，近年來泰樂祺檢測應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測技術(shù)問題，以期望快速提出解決方案。針對近期奶中出現(xiàn)的黃曲霉毒素M1超標(biāo)問題，泰樂祺科技提出以下快速解決方案。

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀配熒光檢測器

1.2 震蕩器（或高速攪拌器）

1.3 高速離心機(jī)

2. 試劑與試液

2.1 色譜甲醇

2.2 蒸餾水

2.3 乙腈+水（25+75）

2.4 石油醚

2.5 10%乙腈

2.6 氫氧化鈉溶液（0.5mol/L）

玻璃纖維濾紙（PriboFast免疫親和柱免費(fèi)贈送）

3. 測定法

本法系用高效液相色譜法（GB/T 18980-2003）測定牛奶，奶粉等產(chǎn)品中的黃曲霉毒素M1，除另有規(guī)定外，按下列方法測定。

3.1 色譜條件

色譜柱：C18柱，150×4.6mm，5um

檢測器：熒光檢測器；激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長435nm；

流動相：乙腈-水（25：75）

流速：1.0ml/min

進(jìn)樣量：20ul

柱溫：室溫

3.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

取黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈稀釋成0.5ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。根據(jù)使用需要，準(zhǔn)確吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置5ml的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，配成相當(dāng)于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液，即得。

3.3 樣品前處理

3.3.1牛奶

將100mL牛奶水浴加熱至40℃；

4000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用；

3.3.2乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品

稱取10g奶粉樣品，將100mL50℃水多次少量加入，攪拌，使奶粉充分溶解；

6000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用；

3.3.3發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

稱取60 g混勻的試樣，用0.5 mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計(jì)指示下調(diào)pH至7.4；

用高速均質(zhì)器在 9500 轉(zhuǎn)/分鐘，高速勻漿5 min

水浴加熱至40℃；

4000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用

3.3.4干酪

稱取經(jīng)切細(xì)、過10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50 mL離心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；

用高速均質(zhì)器在 9500r/分鐘，高速勻漿5 min；

超聲提取30 min；

在6000r/分鐘下離心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。

在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振搖2 min；

待分層后，將下層移于50 mL燒杯中，棄去石油醚層。

重復(fù)用石油醚提取2次；。

將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2 mL；

濃縮液倒入離心管中，燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌，洗滌液一并倒入50 mL離心管中；

加水稀釋至約50 mL，在6000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心 5 min，上清液供凈化處理。

3.3.5奶油

稱取5g試樣，置于50 mL燒杯中；

用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。

加20 mL水和30 mL甲醇，振蕩30 min后，將全部液體移于分液漏斗中；

待分層后，將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5 mL，加水稀釋至約50mL，供凈化處理。

3.4 供試品溶液的制備

3.4.1 PriboFast^®黃曲霉毒素M1免疫親和柱的操作

將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取50.0mL凈化溶液注入玻璃注射器；

將空氣壓力泵與注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2～3mL空氣通過柱體；

更換10ml注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

準(zhǔn)確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min～2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。（建議將乙腈的量分2-4次加入。每次加入后，要讓甲醇充分浸泡柱子里的凝膠2分鐘。洗脫后的乙腈溶液，最好是水浴30℃加熱吹近干。用10%乙腈定容后上液相）

3.5 測定

精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液各20ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密量取供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素M1的量，計(jì)算，即得。

1.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)有相應(yīng)的安全、防護(hù)措施，并不得污染環(huán)境。

2.殘留有黃曲霉毒素M1的廢液或廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于專用貯存容器（裝有10%氯酸鈉溶液）內(nèi)，浸泡24小時以上，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

技術(shù)咨詢請聯(lián)系：北京泰樂祺科技有限公司

電話：010-63395349 63380700 52453171 52453170 13311089404

網(wǎng)址：http://www.rapid-bio.com/

E-mail：rapidbio@126.com

售后服務(wù)

1.我公司保證所提供的產(chǎn)品都是全新，未被使用的，在各方面都符合投標(biāo)文件和招標(biāo)所規(guī)定的質(zhì)量、規(guī)格和性能。
2.保修期：儀器驗(yàn)收合格雙方簽字之日起儀器質(zhì)保壹年，終身維護(hù)。
3.安裝與調(diào)試：公司派出專業(yè)工程師免費(fèi)上門安裝調(diào)試，免費(fèi)為用戶進(jìn)行至少一次關(guān)于使用、維修、保養(yǎng)等方面的集中現(xiàn)場培訓(xùn)。
4.設(shè)備在安裝調(diào)試中所需的附屬材料等均由我公司免費(fèi)提供。
5.儀器發(fā)生故障后與公司售后服務(wù)部聯(lián)系，半個小時內(nèi)給予答復(fù)或電話指導(dǎo)維修。

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