高效液相色譜法:
根據(jù)國標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定
實驗用前處理:
實驗儀器和好耗材包括:
恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M(jìn)1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機(jī) 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實驗用試劑:色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件:
高效液相色譜儀
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色譜柱
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C18柱,150*4.6mm,5um
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流動相
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乙腈-水(25:75)
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熒光檢測器:
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激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm;
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柱 溫
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室溫
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流速
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1.0ml/min
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進(jìn)樣量
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20ul
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出峰時間
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10分鐘左右
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樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程,所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理:分不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度,離心用上清液過柱凈化;
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品:稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型):稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,調(diào)節(jié)PH值至微堿性,高速均質(zhì)器勻漿,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
干酪:稱取適量切細(xì)或粉碎,過篩用加純水溶解,高速均質(zhì)器勻漿,超聲提取后收集上清液,然后用石油醚進(jìn)行兩次萃取,然后用適宜的有機(jī)溶液萃取,取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品,用于蒸餾水溶解中,調(diào)節(jié)PH值至微堿性,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
奶油:稱取適量加甲醇水溶解,震蕩后分頁漏斗取下層溶液,蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟:完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測。
注:收集管中的洗脫液即為純化后的樣品,可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。
HPLC 檢測需要儀器與耗材
產(chǎn)品名稱
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說明
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規(guī)格
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黃曲霉毒素M1固體標(biāo)準(zhǔn)品
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參比對照使用
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100ug 1mg
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黃曲霉毒素M1液體標(biāo)準(zhǔn)品
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濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈
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1ml
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PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱
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用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素
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25/50T
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PriboFast泵流操作架(8位)
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用于免疫親和柱凈化樣品處理,方便控制流速
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黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙
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用于去除HPLC檢測時部分雜峰,有效提高靈敏度。110,1.5um
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100P
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不銹鋼均質(zhì)器
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高速勻漿樣品,有效提高萃取效率
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旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器
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酶聯(lián)免疫檢測法:符合國家標(biāo)準(zhǔn)
酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA,在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液)及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
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Pribolab(普瑞邦),長期專注于食品安全檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù),致力于產(chǎn)品與技術(shù)創(chuàng)新,不斷研發(fā)和拓寬檢測領(lǐng)域,提供真菌毒素、食品過敏原、轉(zhuǎn)基因、獸藥殘留檢測、酶法生物分析前處理用親和柱、多功能凈化柱、ELISA試劑盒/膠體金試紙條、固體/液體標(biāo)準(zhǔn)品、13C穩(wěn)定性同位素內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控樣品及應(yīng)用于前處理的自動化儀器(全自動多樣品均質(zhì)器、全自動標(biāo)準(zhǔn)配制儀、自動化免疫親和操作儀、多功能光電衍生系統(tǒng)等)。普瑞邦不僅僅為客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,同時提供自動化樣品前處理的解決方案。普瑞邦始終秉承“持續(xù)創(chuàng)新”的理念,以優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品賦于檢測精準(zhǔn),以創(chuàng)新技術(shù)推進(jìn)行業(yè)發(fā)展,致力于為行業(yè)提供高品質(zhì)產(chǎn)品和解決方案。
青島普瑞邦生物工程有限公司,是新加坡普瑞邦在中國設(shè)立的綜合性技術(shù)服務(wù)中心。Pribolab(普瑞邦)是面向全球提供真菌毒素解決方案的主要服務(wù)商之一,憑借強大的研發(fā)團(tuán)隊和專業(yè)的真菌毒素檢測技術(shù)的研究,為全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品加工與糧食、飼料工業(yè)等行業(yè)提供專業(yè)的真菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù),同時為社會提供食品、飼料及飲料等的真菌毒素、食品成分等檢測分析。
☆ 霉菌毒素檢測技術(shù)咨詢與產(chǎn)品服務(wù)
包括:標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)(質(zhì)控樣品)、樣品前處理凈化柱和免疫親和柱、ELISA試劑盒
☆ 酶法生物分析試劑盒(液體裝)及葡萄酒專用酶法試劑盒
☆ 動物疾病金標(biāo)檢測卡和ELISA檢測試劑盒
☆ 農(nóng)藥、環(huán)境污染物質(zhì)等樣品前處理凈化柱
☆ 農(nóng)獸藥食品標(biāo)準(zhǔn)品以及固相萃取小柱、濾膜、針式過濾器等色譜耗材
☆ 霉菌毒素、有機(jī)酸、糖類物質(zhì)等檢測分析
電話:400-6885349 0532-84670748
郵箱:info@pribolab.cn
網(wǎng)址:www.pribolab.cn
PriboLab公司提供的霉菌毒素檢測系列產(chǎn)品包括:
免疫親和柱系列:
Pribolab公司憑借其強大的研發(fā)團(tuán)隊和精湛的生產(chǎn)工藝,采用先進(jìn)的單克隆抗體免疫技術(shù)開發(fā)出了一系列毒素免疫親和柱產(chǎn)品,PriboFast免疫親和柱系列產(chǎn)品包括以下特點:
1. 選擇高度特異性和高親和力單克隆抗體,確保獲得高純度的樣品
2. 親和柱容量大,抗體含量高,增加了樣品吸附量,提高了純化效率。
3. 允許大體積樣品過柱純化,對低濃度的樣品有極好的濃縮效果,從而有效的提高了各方法的檢測限
4. 產(chǎn)品通過大量的科學(xué)實驗檢驗,擁有良好的穩(wěn)定性和可靠性,樣品回收率達(dá)到90%‐95%。
5. 產(chǎn)品通用性強,適合多種緩沖液體系,無需復(fù)雜和有毒試劑。
6. 操作簡單快速,單個樣品只需10-15 分鐘。適用性強,無需特定的實驗環(huán)境。
7. 純化樣品適用于 ELISA 法,高效液相色譜法,熒光光度法等。
PriboFast 免疫親和柱系列(3ml)
PriboFast黃曲霉毒素總量免疫親和柱25T
PriboFast黃曲霉毒素B1 免疫親和柱25T
PriboFast黃曲霉毒素M1免疫親和柱25T
PriboFast 玉米赤霉烯酮 免疫親和柱25T
PriboFast嘔吐毒素 免疫親和柱25T
PriboFast 赭曲霉毒素 免疫親和柱25T
PriboFast 伏馬毒素 免疫親和柱25T
PriboFast T-2/HT-2免疫親和柱25T
PriboFast酶聯(lián)免疫檢測試劑盒系列:
PriboFast系列試劑盒全是采用直接競爭法,檢測時間短,步驟簡單,性能穩(wěn)定,檢測限符合國標(biāo)要求。
黃曲霉毒素總量 ELISA試劑盒 96T
黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒 96T
黃曲霉毒素B1 ELISA試劑盒 96T
玉米赤霉烯酮 ELISA試劑盒 96T
嘔吐毒素 ELISA試劑盒 96T
赭曲霉毒素 ELISA試劑盒 96T
柱系列:
包括有兩種類型 柱壓型(帶玻璃試管)/推桿型(針筒式)
PriboFast系列多功能凈化柱采取的方法就是多重機(jī)制吸附雜質(zhì)并快速萃取凈化的方法。
PriboFast系列多功能凈化柱,能夠及時快速地對從食品、飼料、飲料、藥材中提取的待檢液進(jìn)行凈化,使用快捷、方便,減少萃取步驟,有效保證分析的更加準(zhǔn)確可靠,降低檢測成本,有效提高檢測效率。
PriboFast 226/260多功能凈化柱(黃曲霉毒素,玉米赤霉烯酮)25T
PriboFast 228/280多功能凈化柱(黃曲霉毒素,展青霉素)25T
PriboFast 227/270(適用單端孢霉烯族毒素) 25T
PriboFast 210 凈化柱(適用于伏馬毒素檢測)25T
PriboFast 290凈化柱(適用于赭曲霉毒素檢測)25T
PriboFast 230凈化柱(適用于環(huán)匹阿尼酸檢測)25T