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奶及奶制品中黃曲霉素M1專業(yè)解決方案
Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)
服務(wù)類別:其他生物研發(fā)總訪問:3986
最后更新:2021-10-14半年訪問:38
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高效液相色譜法:
根據(jù)國標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定
 實驗用前處理:
實驗儀器和好耗材包括:
恒溫水浴鍋  溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M(jìn)1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機(jī)  定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
  實驗用試劑:色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件:

 

高效液相色譜儀
 
色譜柱
C18柱,150*4.6mm,5um
流動相
乙腈-水(25:75)
熒光檢測器:
激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm;
柱 溫
室溫
流速
1.0ml/min
進(jìn)樣量
20ul
出峰時間
10分鐘左右
 
樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程,所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理:分不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度,離心用上清液過柱凈化;
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品:稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)稱取適量奶粉樣品,用于蒸餾水中,調(diào)節(jié)PH值至微堿性,高速均質(zhì)器勻漿,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
干酪:稱取適量切細(xì)或粉碎,過篩用加純水溶解,高速均質(zhì)器勻漿,超聲提取后收集上清液,然后用石油醚進(jìn)行兩次萃取,然后用適宜的有機(jī)溶液萃取,取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品,用于蒸餾水溶解中,調(diào)節(jié)PH值至微堿性,水浴加熱后離心,取上清液混合均勻使其充分溶解,離心離心用上清液過柱凈化;
奶油:稱取適量加甲醇水溶解,震蕩后分頁漏斗取下層溶液,蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟:完全符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測。
:收集管中的洗脫液即為純化后的樣品,可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。
HPLC 檢測需要儀器與耗材

 

產(chǎn)品名稱
說明
規(guī)格
黃曲霉毒素M1固體標(biāo)準(zhǔn)品
參比對照使用
100ug 1mg  
黃曲霉毒素M1液體標(biāo)準(zhǔn)品
濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈
1ml 
PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱
用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素
25/50T
PriboFast泵流操作架(8位)
用于免疫親和柱凈化樣品處理,方便控制流速
 
黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙
用于去除HPLC檢測時部分雜峰,有效提高靈敏度。110,1.5um
100P
 
不銹鋼均質(zhì)器
 高速勻漿樣品,有效提高萃取效率
 
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器
 
 
酶聯(lián)免疫檢測法:符合國家標(biāo)準(zhǔn)
酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA,在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液)及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

 

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售后服務(wù)
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2.保修期:儀器驗收合格雙方簽字之日起儀器質(zhì)保壹年,終身維護(hù)。
3.安裝與調(diào)試:公司派出專業(yè)工程師免費上門安裝調(diào)試,免費為用戶進(jìn)行至少一次關(guān)于使用、維修、保養(yǎng)等方面的集中現(xiàn)場培訓(xùn)。
4.設(shè)備在安裝調(diào)試中所需的附屬材料等均由我公司免費提供。
5.儀器發(fā)生故障后與公司售后服務(wù)部聯(lián)系,半個小時內(nèi)給予答復(fù)或電話指導(dǎo)維修。
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