黃曲霉毒素B1免疫親和柱操作說明

檢測(cè)黃曲霉毒素B1免疫親和柱操作說明及注意事項(xiàng)

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最后更新：	2021-10-14	半年訪問：	82
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服務(wù)商：青島普瑞邦生物工程有限公司

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【樣本處理步驟】

（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料

┅┅取25g粉碎的樣品（植物油脂直接取樣，無需處理）與125mL甲醇-水（7：3）溶液混合；

┅┅加入5.0g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取2分鐘；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取稀釋后液體待測(cè)；

┅┅將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。

（二）醬油

┅┅取50g試樣與100mL甲醇-水（8：2）溶液混合；

┅┅加入2.5g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取1分鐘；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液并加入40mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測(cè)；

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。

（三）食醋

┅┅取5g試樣，加入1.0g氯化鈉；

┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至25.0mL；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液并加入10mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾

┅┅取稀釋后液體待測(cè)。

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。

【結(jié)果判定】

經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè)，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。收集到的1mL洗脫液中的黃曲霉毒素B₁含量相當(dāng)于1g樣品中黃曲霉毒素B₁含量。

【高效液相參考譜圖】

【注意事項(xiàng)】

┅┅黃曲霉毒素危害極大，應(yīng)戴手套操作。

┅┅使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度次氯酸鈉溶液浸泡過夜。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱

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1.我公司保證所提供的產(chǎn)品都是全新，未被使用的，在各方面都符合投標(biāo)文件和招標(biāo)所規(guī)定的質(zhì)量、規(guī)格和性能。
2.保修期：儀器驗(yàn)收合格雙方簽字之日起儀器質(zhì)保壹年，終身維護(hù)。
3.安裝與調(diào)試：公司派出專業(yè)工程師免費(fèi)上門安裝調(diào)試，免費(fèi)為用戶進(jìn)行至少一次關(guān)于使用、維修、保養(yǎng)等方面的集中現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)。
4.設(shè)備在安裝調(diào)試中所需的附屬材料等均由我公司免費(fèi)提供。
5.儀器發(fā)生故障后與公司售后服務(wù)部聯(lián)系，半個(gè)小時(shí)內(nèi)給予答復(fù)或電話指導(dǎo)維修。

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