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油菜花藥培養(yǎng)的單倍體育種

油菜花藥培養(yǎng)的單倍體育種


Haploid breeding of rape anther culture
利用單倍體育種是克服雜種分離，提高獲得純和材料的效率，縮短育種年限的有效手段。花藥離體培養(yǎng)獲得單倍體育種在實(shí)踐中得到應(yīng)用，武漢雙螺旋生物科技有限公司對油菜花藥離體培養(yǎng)已具備一定成熟的經(jīng)驗(yàn)。
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利用單倍體育種是克服雜種分離，提高獲得純和材料的效率，縮短育種年限的有效手段�；ㄋ庪x體培養(yǎng)獲得單倍體育種在實(shí)踐中得到應(yīng)用，油菜花藥離體培養(yǎng)已具備一定成熟的經(jīng)驗(yàn)。

油菜花藥培養(yǎng)的方法及程序：

油菜花藥培養(yǎng)的方法有幾種，但以液體添浮分步培養(yǎng)法效果較好。培養(yǎng)基為keller改良B

 1.花的采摘及小孢子發(fā)育時期檢驗(yàn)  采收花蕾長1-1.5毫米的主花序3-10厘米作為材料，剪除不不合要求部分，用紗布包好，放入有標(biāo)記（寫明材料來源）的小燒杯中，加入少量清水。用醋酸洋紅或PICCH染色液染色，觀察小孢子發(fā)育時期，在小孢子發(fā)育為早核早期（即單核靠邊期）培養(yǎng)及為理想，是小孢子啟動的最佳期，容易進(jìn)行分裂二形成細(xì)胞團(tuán)，這是形成胚狀體的先決條件。

 2.預(yù)處理 把選擇好的材料進(jìn)行低溫預(yù)處理，放在8-10攝氏度的陰暗處5-8天，以提高胚狀體誘導(dǎo)率，一直仿繡體形成，出發(fā)小孢子進(jìn)行異化發(fā)育，從而形成二個貌似的核，產(chǎn)生第一次有絲分裂。預(yù)處理的作用在于小孢子保持較強(qiáng)的生活力，延遲衰老和防止花粉敗育，增加可用活化花粉數(shù)。

 3.材料的滅菌 將花序在70%的酒精中迅速浸一下，取出放在0.1%升汞（或飽和漂白粉）溶液，浸泡10f分鐘，取出后在超凈工作臺上剝?nèi)』ㄋ帯?/p>

 4.接種 在超凈工作臺上進(jìn)行無菌剝蕾、取藥，注意保留好花藥，傷損者剔除，種在改良B。液體培養(yǎng)基上進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，培養(yǎng)過程如下：

（1）高濕暗培養(yǎng)：培養(yǎng)時間在2-3天，這階段是小孢子啟動分列前期，瓷器的特點(diǎn)是粉壁變薄并開始分裂，分列式均等的，兩個子核子在形態(tài)上十分相似，這是高濕處理十微管溶解，紡錘體解體的異變分裂的結(jié)果。

（2）常溫暗培養(yǎng)：培養(yǎng)時間在7-10天，這階段的作用在于為形成胚狀體創(chuàng)造最佳條件，適合細(xì)胞分裂。此期的特點(diǎn)是前期在鏡下可見到細(xì)胞團(tuán)，后期出現(xiàn)小胚狀體，這期間更換1-2次培養(yǎng)基。

（3）常溫光培養(yǎng)：出現(xiàn)胚狀后立即轉(zhuǎn)移至光下進(jìn)行培養(yǎng)，這階段是黃色胚狀體見光后變?yōu)榫G色，繼而發(fā)育成小植株。此階段把形成胚狀體的部分移至B。固體培養(yǎng)基或用1/2MS培養(yǎng)基。糖的濃度降至2%。這階段應(yīng)保證溫度、光熱及通氣等條件，經(jīng)常更換培養(yǎng)基，保證其順利發(fā)育。發(fā)育的過程一般是先長出不定形葉，繼而長出芽點(diǎn)，然后形成正常的單倍體植株。

 5.鍛煉及成苗  把長出正常植株的三角瓶瓶口打開，在光下鍛煉1-2周，取出幼苗，洗凈培養(yǎng)基，移苗至培養(yǎng)體中，放在適宜的條件下進(jìn)行成苗培養(yǎng)。

 6.染色體的檢驗(yàn) 取幼苗進(jìn)行鑒定，用對二氯苯飽和水溶液預(yù)處理4小時，然后固定24小時，通過95%-50%的遞降乙醇液，用清水沖洗，放入1N鹽酸中浸5-10分鐘，換入新的1N鹽酸液在60攝氏度的水浴中離解10分鐘，過一下涼的1N鹽酸，在錫夫氏試劑中染色過夜，用漂洗液漂凈，然后水洗，最后在PICCH染色液或45%的醋酸中壓片，在顯微鏡下鑒定染色體數(shù)目。

 7.染色體加倍  用0.05%的秋水仙素進(jìn)行根系浸泡24小時，用水沖洗干凈，定植在田圃。

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