噬菌體展示技術(shù)服務(wù) 天津賽爾生物

                                     噬菌體展示技術(shù)服務(wù)
噬菌體展示系統(tǒng)作為篩選與多種靶分子 ( 如核酸、抗體、酶類、脂多糖和細(xì)胞表面受體等 ) 具有特異性親和力的肽的一個(gè)有效方法 ,已被廣泛地應(yīng)用于基因治療、基因疫苗研究、抗原表位研究、藥物篩選與設(shè)計(jì)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)研究等領(lǐng)域。天津賽爾可以為客戶提供基于M13噬菌體的NEB Ph.D 噬菌體展示七肽文庫篩選服務(wù)，也可根據(jù)客戶的需要利用客戶提供的肽文庫進(jìn)行篩選。 1.技術(shù)原理及背景介紹 　 噬菌體展示技術(shù)（phage displayed technology，PDT）是將外源蛋白或多肽與噬菌體外殼蛋白融合，展示在噬菌體表面并保持特定的空間構(gòu)象，利用特異性親和作用以篩選特異性蛋白或多肽的一項(xiàng)新技術(shù)。1985年Smith，G.P提出將外源基因插入改建過的噬菌體外殼蛋白基因，表達(dá)含有外源蛋白或多肽的融合蛋白，這種帶有融合蛋白的噬菌體稱為融合噬菌體。通過吸附-洗脫-擴(kuò)增的重復(fù)過程，將含有能與靶蛋白特異結(jié)合的外源蛋白的噬菌體從表達(dá)各種外源蛋白的噬菌體庫中篩選出來，然后進(jìn)行富集、擴(kuò)增及基因序列測(cè)定，推斷外源蛋白的氨基酸組成。該技術(shù)將基因型與表型、分子結(jié)合活性與噬菌體的可擴(kuò)增性結(jié)合在一起，是一種高效的篩選新技術(shù)。目前已成功應(yīng)用于抗原表位分析，單抗篩選，蛋白質(zhì)功能拮抗多肽或模擬多肽的確定等。在藥物篩選、疫苗設(shè)計(jì)等方面發(fā)揮重要作用。 　 蛋白質(zhì)分子間相互作用研究表明：相互結(jié)合的兩個(gè)分子間少數(shù)幾個(gè)關(guān)鍵基團(tuán)的弱相互作用提供了絕大部分的結(jié)合能力；含有與結(jié)合有關(guān)的幾個(gè)關(guān)鍵基團(tuán)的線性短肽可以模擬蛋白質(zhì)分子相互作用部位的空間構(gòu)象。在肽類分子與蛋白質(zhì)分子的識(shí)別并結(jié)合過程中，肽的最佳長度在8~12個(gè)氨基酸之間，其中起作用的是5~8個(gè)氨基酸殘基，甚至2個(gè)或3個(gè)核心氨基酸殘基。因此，通過合理設(shè)計(jì)而合成的短肽可以表現(xiàn)出原蛋白的某些活性。 　 將待篩選基因（數(shù)量可在109以上）插入噬菌體信號(hào)肽序列與主要衣殼蛋白基因VIII或基因III之間，每一個(gè)噬菌體只含有一個(gè)外源基因，即可構(gòu)建成含有109種融合蛋白的噬菌體肽庫，每一個(gè)噬菌體只表達(dá)一種外源肽或蛋白，且呈現(xiàn)在噬菌體表面，而且不影響噬菌體的完整性。利用展示的多肽與目的蛋白（主要是抗體、抗原及一些細(xì)胞生長因子受體等）或其他生物大分子親和的性質(zhì)可高效率地篩選出特異多肽。即先將靶蛋白固相化，如結(jié)合在塑料板（96孔板）上，加入文庫噬菌體與之反應(yīng)。經(jīng)過洗滌，未結(jié)合的噬菌體被洗掉，有親和力的噬菌體即被俘獲，俘獲的噬菌體經(jīng)洗脫后再感染大腸桿菌進(jìn)一步擴(kuò)增。這樣一種“吸附-洗滌-擴(kuò)增”的富集過程稱為淘篩。一輪淘篩可以使噬菌體富集103倍，經(jīng)過幾輪淘篩就能從109~1010 的噬菌體肽庫中篩選得到與靶蛋白相互作用的短肽，一般要進(jìn)行3~4輪淘篩。親和篩選的關(guān)鍵在于靶蛋白與短肽間的特異性結(jié)合，但往往由于一些原因，如短肽的多價(jià)表達(dá)，使得一些非特異結(jié)合的短肽也被篩選出來。為了增加篩選的特異性，在篩選的過程中都是不斷地降低篩選配基的濃度，從而保證被篩選得到的短肽與靶蛋白有較強(qiáng)的親和力，即它們的結(jié)合是特異性的。 　 2.服務(wù)內(nèi)容 該服務(wù)利用NEB的Ph.D.-7，12 Phage Display Peptide Library進(jìn)行文庫篩選，尋找與某種興趣生物大分子相互作用的多肽片段，服務(wù)內(nèi)容主要包括: 1). 噬菌體文庫的滴定； 2). 三次文庫表面淘選以篩選陽性噬菌體克��； 3). 擴(kuò)增陽性克隆并通過ELISA檢測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證，對(duì)克隆進(jìn)行測(cè)序鑒定。 3服務(wù)明細(xì)： 服務(wù)項(xiàng)目 內(nèi)容說明 工作日 服務(wù)價(jià)格 噬菌體展示多肽庫篩選 采用商品化多肽庫 30 ￥10 000 噬菌體展示單鏈抗體庫構(gòu)建和篩選 60 詢價(jià) 噬菌體展示Fab抗體庫構(gòu)建和篩選 80 詢價(jià) 您需要提供足夠的興趣蛋白或生物大分子(至少2mg)。 我們向您呈交什么 在收到您提供的原料及付款憑證后我們將立即展開實(shí)驗(yàn)，20-30個(gè)工作日左右告知噬菌體文庫滴定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，30-80個(gè)工作日左右完成文庫淘選，30-50個(gè)工作日左右告知測(cè)序及ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 我們會(huì)以書面和電子文檔形式向您提供實(shí)驗(yàn)各階段全部實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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