酵母雙雜交服務(wù) 天津賽爾生物

酵母雙雜交服務(wù)
目前天津賽爾生物可提供適用于漿蛋白、核蛋白及膜蛋白酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)服務(wù)的兩套系統(tǒng)，可以為客戶免費(fèi)提供配套的人胚腦和人胚肺文庫(kù)，省去了文庫(kù)構(gòu)建的巨大費(fèi)用，全程服務(wù)都會(huì)由本公司的酵母雙雜交技術(shù)專家操作，每位技術(shù)專家均有著豐富的酵母雙雜交技術(shù)服務(wù)的經(jīng)驗(yàn)，可以很好的幫助客戶分析并解決在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的各種問(wèn)題。 1.技術(shù)原理及背景介紹 隨著分子生物學(xué)研究尤其是人類基因組計(jì)劃的迅速發(fā)展，為適應(yīng)對(duì)眾多基因或蛋白進(jìn)行功能研究的發(fā)展趨勢(shì)，已出現(xiàn)了很多新技術(shù)。其中酵母雙雜交技術(shù)以其簡(jiǎn)便，靈敏，高效以及能反映不同蛋白質(zhì)之間在活細(xì)胞內(nèi)的相互作用等特點(diǎn)在基因功能的研究中得到了廣泛的應(yīng)用。 酵母雙雜交系統(tǒng)的建立基于對(duì)真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程的認(rèn)識(shí)。酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4含兩個(gè)結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合功能域和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，前者可識(shí)別DNA上的特異序列，并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)基因的上游，后者同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用，啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。將編碼DNA結(jié)合功能域的基因與已知誘餌蛋白質(zhì)基因構(gòu)建在同一個(gè)表達(dá)載體上，在酵母中表達(dá)兩者的融合蛋白，將編碼DNA轉(zhuǎn)錄激活域的基因和cDNA文庫(kù)的基因構(gòu)建在AD—LIBRARY表達(dá)載體上，同時(shí)將上述兩種載體轉(zhuǎn)化改造后的酵母。當(dāng)兩種載體所表達(dá)的融合蛋白能夠相互作用時(shí)，功能重建的反式作用因子能夠激活酵母基因組中的報(bào)告基因，從而通過(guò)功能互補(bǔ)和顯色反應(yīng)篩選到陽(yáng)性菌落。將陽(yáng)性反應(yīng)的酵母菌株中的AD—LIBRARY載體提取分離出來(lái)，從而對(duì)載體中插入的文庫(kù)基因進(jìn)行測(cè)序和分析工作。 基于酵母雙雜交技術(shù)平臺(tái)的特點(diǎn)，它已經(jīng)被應(yīng)用在許多研究工作中，包括：①用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫(kù)，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑；②分析新基因的生物學(xué)功能。即以功能未知的新基因去篩選文庫(kù)。然后根據(jù)釣到的已知基因的功能推測(cè)該新基因的功能；③篩選藥物的作用位點(diǎn)以及藥物對(duì)蛋白質(zhì)之間相互作用的影響；④檢驗(yàn)一對(duì)功能已知蛋白間的相互作用；⑤在細(xì)胞體內(nèi)研究抗原和抗體的相互作用等等。 2.服務(wù)內(nèi)容 目前我們可提供適用于漿蛋白、核蛋白及膜蛋白酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)服務(wù)的兩套系統(tǒng)，包括：Clontech GAL4-based two-hybrid system 適用于誘餌蛋白為漿蛋白、核蛋白 Stratagene Cytotrap Psos system 適用于誘餌蛋白為膜蛋白 具體服務(wù)內(nèi)容包括： ①蛋白質(zhì)兩兩之間相互作用的實(shí)驗(yàn) 內(nèi)容包括： 1). 基因克隆的獲得及DNA測(cè)序檢驗(yàn)； 2). 基因的酵母雙雜交載體構(gòu)建及其DNA測(cè)序檢驗(yàn)；； 3). 每個(gè)基因克隆的酵母雙雜交自激活檢驗(yàn)； 4). 酵母細(xì)胞內(nèi)的相互作用驗(yàn)證 提供： 技術(shù)服務(wù)報(bào)告（實(shí)驗(yàn)操作流程，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、圖表、照片）。 ②蛋白質(zhì)與文庫(kù)相互作用的實(shí)驗(yàn) 內(nèi)容包括： 1). 誘餌基因克隆的獲得及DNA測(cè)序檢驗(yàn)； 2). 誘餌基因的酵母雙雜交載體構(gòu)建及其DNA測(cè)序檢驗(yàn)； 3). 誘餌基因的酵母雙雜交自激活檢驗(yàn)； 4). 酵母雙雜交文庫(kù)篩選； 5). 酵母細(xì)胞內(nèi)的相互作用驗(yàn)證（酵母回轉(zhuǎn)驗(yàn)證）； 6). 陽(yáng)性克隆DNA序列測(cè)定； 提供： 1). 技術(shù)服務(wù)報(bào)告（實(shí)驗(yàn)操作流程，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、圖表、照片）。 2). 篩到的相互作用陽(yáng)性克隆DNA和菌株實(shí)物。 下面是公司為客戶一實(shí)例 　 我們可以為客戶提供配套的人胚腦和人胚肺文庫(kù)，但是對(duì)于一些特殊組織的文庫(kù)，需要客戶自己提供，或者可以委托賽爾公司幫助制備。全程服務(wù)都會(huì)由本公司的酵母雙雜交技術(shù)專家操作，每位技術(shù)專家均有著豐富的酵母雙雜交技術(shù)服務(wù)的經(jīng)驗(yàn)，可以很好的幫助客戶分析并解決在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的各種問(wèn)題。 賽爾生物相關(guān)服務(wù)： MicroRNA相關(guān)服務(wù) siRNA干擾 課題整體外包服務(wù) 基因克隆服務(wù) 慢病毒包裝服務(wù) 腺病毒服務(wù) 穩(wěn)定細(xì)胞株篩選服務(wù) 蛋白表達(dá)服務(wù) 抗體制備服務(wù) DNA與蛋白相互作用研究 噬菌體展示技術(shù)服務(wù) cDNA文庫(kù)構(gòu)建 干細(xì)胞研究 基金申請(qǐng)，標(biāo)書撰寫，專利申請(qǐng)，課題設(shè)計(jì)等。

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