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串聯(lián)親和純化/質譜

串聯(lián)親和純化/質譜


(Tandem affinity purification,TAP/MS)
TAP/MS是Co-IP/MS的“近親”,兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP/MS經(jīng)過2步親和純化,而Co-IP/MS只有1步親和純化,
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TAP/MS服務簡介-輝駿生物
TAP/MS是Co-IP/MS的“近親”,兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP/MS經(jīng)過2步親和純化,而Co-IP/MS只有1步親和純化,故而TAP/MS可以有效減少非特異蛋白的結合。

基本流程:
構建含有目的基因的載體,使目的基因與2個不同的表位標簽融合表達,如Flag、HA、His、CBP、SBP等等。輝駿生物采用Flag-HA雙標簽載體;載體轉染細胞并表達融合蛋白“Flag-HA-誘餌蛋白”;細胞裂解提取總蛋白,經(jīng)anti-flag樹脂和anti-HA樹脂的兩步純化和洗脫,更大限度了去除了假陽性蛋白。洗脫液進入質譜儀,分析鑒定與誘餌蛋白具有相互作用的蛋白。
 
TAP/MS技術優(yōu)勢-輝駿生物
1.TAP/MS得到的互作蛋白是在細胞內與誘餌蛋白結合的,符合體內真實生理情況,得到的結果可信度高。
2.采用兩步純化,可以有效的減少非特異蛋白的結合,并避免因過度沖洗而產(chǎn)生的復合體解離。 

TAP/MS服務內容-輝駿生物
1.構建融合Flag-HA的誘餌蛋白真核表達載體或者慢病毒載體
2.載體瞬時轉染靶細胞或包裝慢病毒感染靶細胞
3.TAP純化互作蛋白
4.質譜鑒定互作蛋白 

TAP/MS服務須知-輝駿生物

服務項目 客戶提供 交付產(chǎn)物 實驗周期
TAP/MS-瞬轉 1、誘餌基因的名稱、序列、物種等相關信息或者誘餌基因的克隆產(chǎn)物
2、待研究的細胞
1、帶有誘餌基因和flag-HA的真核表達載體
2、互作蛋白的質譜鑒定結果
1-2個月
TAP/MS-穩(wěn)轉 1、誘餌基因的名稱、序列、物種等相關信息或者誘餌基因的克隆產(chǎn)物
2、待研究的細胞
1、帶有誘餌基因和flag-HA的慢病毒表達載體
2、互作蛋白的質譜鑒定結果
3、穩(wěn)定轉染的細胞株
2.5-4個月


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