【細(xì)胞實(shí)驗(yàn)】——細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲、細(xì)胞流式檢測等

1、細(xì)胞侵襲（點(diǎn)擊可查看詳情）

Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu)，這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。濾膜孔徑一般為8μm，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細(xì)胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運(yùn)動(dòng)才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內(nèi)情況較為相似�？赏ㄟ^這種模型來檢測細(xì)胞的侵襲情況。

通過體外模型來檢測細(xì)胞侵襲情況，主要應(yīng)用于各種細(xì)胞因子對惡性腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究。

實(shí)驗(yàn)步驟

2、細(xì)胞粘附

細(xì)胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs) 是一類膜表面糖蛋白，它們以配體－受體特異性結(jié)合的方式介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的相互接觸和結(jié)合并調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，在胚胎發(fā)育和分化、正常組織結(jié)構(gòu)的維持、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、凝血和血栓形成、創(chuàng)傷修復(fù)、腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移等許多生理和病理過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。

實(shí)驗(yàn)步驟

3、細(xì)胞遷移

將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)等的影響。

實(shí)驗(yàn)步驟

4、流式細(xì)胞檢測

流式細(xì)胞檢測技術(shù)是利用流式細(xì)胞儀，以高能量激光照射高速流動(dòng)狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒，測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度，從而對細(xì)胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)。

實(shí)驗(yàn)步驟

5、流式細(xì)胞周期

PI ，即碘化丙錠，可以與細(xì)胞內(nèi)DNA 和RNA 結(jié)合，采用RNA酶將RNA消化后，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測到的與DNA 結(jié)合的PI 的熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量的多少。由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA 含量不同，通常正常細(xì)胞的 G0/G1 期具有二倍體細(xì)胞的DNA 含量(2N) ，而G2/ M 期具有四倍體細(xì)胞的DNA 含量(4N) ，而S 期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。

因此，通過流式細(xì)胞術(shù)PI染色法對細(xì)胞內(nèi)DNA 含量進(jìn)行檢測時(shí)，可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為 G0/G1 期，S 期和G2/ M期，并可通過特殊軟件計(jì)算各時(shí)相的百分率。

實(shí)驗(yàn)步驟

6、流式細(xì)胞分選

流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀，以高能量激光照射高速流動(dòng)狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒，測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度，從而對細(xì)胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實(shí)現(xiàn)單克隆分選，對復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離，分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等。

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7 、流式細(xì)胞凋亡

在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS） 由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。

將Annexin V進(jìn)行熒光素（EGFP、FITC）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

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8、細(xì)胞增殖MTT

活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高。

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9、透射電鏡

利用電子射線（或稱電子束）穿透樣品，而后經(jīng)多級(jí)電子放大后成像于熒光屏。透射率高，可以用來觀察組織和細(xì)胞內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)以及微生物和生物大分子的全貌。能分辨0.1納米以下的微細(xì)物質(zhì)結(jié)構(gòu),放大倍數(shù)可達(dá)100萬余倍。

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10、掃描電鏡

在光學(xué)顯微鏡下小于0.2mm的一些細(xì)微結(jié)構(gòu)，即便是再提高放大倍數(shù)也無法看清，這些結(jié)構(gòu)稱為亞顯微結(jié)構(gòu)或超微結(jié)構(gòu)。

要想看清這些結(jié)構(gòu)，就必須選擇波長更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。目前掃描電鏡的分辨力為6~10nm，掃描電鏡的最大有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X。

樣品制備簡單，放大倍數(shù)大，分辨率高，場景深，圖像立體感豐富，易于識(shí)別和解釋，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。

實(shí)驗(yàn)步驟

上海鈺森生物技術(shù)有限公司成立10多年，專注科研服務(wù)，建立了自己的實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)，能夠提供動(dòng)物造模、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞染色、侵襲、趨化、轉(zhuǎn)移、增殖、活性、凋亡等）、免疫印跡（WB）、PCR和Q-PCR、免疫組化（IHC-P/F）、免疫共沉淀(Co-IP)、質(zhì)粒構(gòu)建、病毒包裝、RNA干擾……多項(xiàng)單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)和課題總包服務(wù)，是國內(nèi)自建較全面基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、最早從事生物技術(shù)服務(wù)為數(shù)不多的公司之一。

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