HPLC質(zhì)量肽譜圖

——即質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜的分析技術(shù)服務(wù)

質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜是利用MALDI-TOF質(zhì)譜儀將用特異性酶水解蛋白質(zhì)后的肽片段進行分子質(zhì)量測定。

質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜分析是蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)研究中極為重要的手段之一，不但可以比較重組與天然蛋白質(zhì)結(jié)果之間的同一性，確認基因工程上游和下游處理過程中是否發(fā)生差錯、重組產(chǎn)物中是否存在后轉(zhuǎn)譯化學(xué)修飾及未預(yù)期氨基酸的變異等，而且不同批次產(chǎn)品的肽譜比較可驗證工藝過程的穩(wěn)定性。因此，肽譜分析在基因工程產(chǎn)品質(zhì)控中尤為重要。

質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜分析是肽圖檢查法（藥典要求）的有效補充

技術(shù)指標

■  樣品要求：

目標蛋白質(zhì)濃度：> 1μg/μl

目標蛋白質(zhì)總量： > 10μg

目標蛋白質(zhì)純度： > 90%

■  4800 MALDI-TOF/TOF技術(shù)參數(shù)：

AB SCIEX公司的4800 plus MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜儀具有極高的分辨率和靈敏度。在對實際樣品的分析中分辨率可以達到18000，靈敏度達到ng級；一級質(zhì)譜范圍：800-4000m/z，每張圖譜累加500個Laser Shots。

質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜的譜圖

案例分析

•    樣品信息：XXXXXXXXX受體 - 抗體融合蛋白
•    樣品批號：XXXXXXXXX
•    對不同批次的重組XXXXXXXXX受體 - 抗體融合蛋白進行質(zhì)量肽譜測試。結(jié)果發(fā)現(xiàn)批次間平行性較好，且可以通過一級質(zhì)譜peaklist進行MASCOT檢索蛋白質(zhì)樣品理論序列數(shù)據(jù)庫，獲得樣品覆蓋率信息，進一步確證批間平行性。

Q&A

   1)   質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜和HPLC肽圖檢查法之間的關(guān)系。

HPLC肽圖檢查法是基于色譜的肽圖檢查法，而質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜是基于質(zhì)譜的肽圖檢查法。質(zhì)譜法突出的優(yōu)點為可進行混合物分析，在一次測定中可以給出混合物中所有物質(zhì)準確的分子量，它與酶解或化學(xué)降解結(jié)合后是確認基因工程藥物與天然組分一級結(jié)構(gòu)一致性的好方法，具有快速、準確、結(jié)果直觀的優(yōu)點，是對HPLC肽圖檢查法強有力的補充。

由于質(zhì)譜法質(zhì)量肽譜測定時上樣微量化，且樣品與基質(zhì)混合不均一，使得蛋白質(zhì)樣品的酶解肽段不能完全被檢測出來，從而遺漏部分樣品信息。而HPLC質(zhì)量肽圖法，由于前端色譜柱的分離作用，可以檢測到更多低豐度的肽段信息，從而得到更加全面的樣品信息。

通過電噴霧離子化質(zhì)譜（ESI/MS）進行肽圖測定檢查，既可以得到相應(yīng)的色譜圖譜，也可以得到各色譜峰的細節(jié)信息，且可以得到相應(yīng)的肽段分子量，通過檢索樣品理論序列可進一步確認各色譜峰肽段對應(yīng)理論序列，可同時進行定性和定量，并對樣品的翻譯后修飾進行鑒別，可以為蛋白類藥物的質(zhì)控提供更好的檢測參數(shù)和結(jié)構(gòu)信息確認。