采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量的方法,能夠精確的對蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。
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非標(biāo)定量技術(shù)(LFQ)
采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量的方法,能夠精確的對蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。然而,標(biāo)記定量的方法也存在某些不足之處:包括,額外的樣品處理過程,昂貴的標(biāo)記試劑,不完全標(biāo)記導(dǎo)致樣品復(fù)雜化,低豐度多肽難以檢測,可標(biāo)記樣品數(shù)量有限等。作為替代,非標(biāo)記定量技術(shù)(LFQ,label-free quantification)能夠避免此類缺陷。LFQ定量通?刹捎脙煞N方式:(1)譜圖計(jì)數(shù)法(Spectral counting),使用多肽被鑒定次數(shù)來代表對應(yīng)多肽的相對含量,進(jìn)而計(jì)算出對應(yīng)蛋白的相對表達(dá)量;(2)母離子強(qiáng)度(precursor ion intensity),提取鑒定到的多肽在一級質(zhì)譜(MS1)中的色譜峰面積代表其相對含量,然后計(jì)算出對應(yīng)蛋白的相對表達(dá)量。和標(biāo)記定量技術(shù)不同在于:標(biāo)記定量樣品預(yù)先混合并同時(shí)進(jìn)行LC-MS/MS檢測,而LFQ技術(shù)要求每個(gè)樣品獨(dú)立進(jìn)行制備和LC-MS/MS檢測,因此準(zhǔn)確性和通量弱于標(biāo)記定量技術(shù)。
圖1. Label-free定量技術(shù)原理。
技術(shù)優(yōu)勢
• LFQ定量技術(shù)克服了同位素標(biāo)記定量技術(shù)的諸多限制,更加靈活,適用于各種樣品;更高的靈敏度,定量更多的蛋白。
• 特異性與靈敏度兼?zhèn)洌夯谫|(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)精確到單個(gè)氨基酸位點(diǎn),蛋白鑒定準(zhǔn)確,靈敏度高,是profiling分析和PTM研究的強(qiáng)大工具。
• 嚴(yán)格的質(zhì)量控制:數(shù)據(jù)穩(wěn)定、重現(xiàn)性好,定量動(dòng)態(tài)范圍廣,多個(gè)樣品平行處理,接近標(biāo)記定量的定量準(zhǔn)確性。
• 專業(yè)的數(shù)據(jù)分析:標(biāo)準(zhǔn)的搜庫流程,專業(yè)的統(tǒng)計(jì)和生信分析,出版級的圖表展示,完整全面的分析報(bào)告。
樣品要求
樣品類型 |
樣品要求 |
蛋白質(zhì)提取物 |
濃度 >1μg/μl,蛋白質(zhì)總量 >200μg |
細(xì)胞樣品 |
細(xì)胞量 >5×106 |
組織樣品 |
動(dòng)物、微生物組織濕重 >100mg |
體液樣品 |
血液體積 >500μl,血清、血漿、腦脊液 >500μl,尿液 >50ml |
* 姓 名: |
* 地 區(qū): |
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職 位: |
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請寄產(chǎn)品資料: |
需要 不需要 | 請報(bào)價(jià)格: |
需要報(bào)價(jià) 不需要報(bào)價(jià) |
留 言: |
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驗(yàn)證碼: |
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