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非標(biāo)定量技術(shù)(LFQ)

非標(biāo)定量技術(shù)(LFQ)


Label-free quantification
采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量的方法,能夠精確的對蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。
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最后更新:2018-11-26半年訪問:79
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非標(biāo)定量技術(shù)(LFQ)

 

    采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量的方法,能夠精確的對蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。然而,標(biāo)記定量的方法也存在某些不足之處:包括,額外的樣品處理過程,昂貴的標(biāo)記試劑,不完全標(biāo)記導(dǎo)致樣品復(fù)雜化,低豐度多肽難以檢測,可標(biāo)記樣品數(shù)量有限等。作為替代,非標(biāo)記定量技術(shù)(LFQ,label-free quantification)能夠避免此類缺陷。LFQ定量通?刹捎脙煞N方式:(1)譜圖計(jì)數(shù)法(Spectral counting),使用多肽被鑒定次數(shù)來代表對應(yīng)多肽的相對含量,進(jìn)而計(jì)算出對應(yīng)蛋白的相對表達(dá)量;(2)母離子強(qiáng)度(precursor ion intensity),提取鑒定到的多肽在一級質(zhì)譜(MS1)中的色譜峰面積代表其相對含量,然后計(jì)算出對應(yīng)蛋白的相對表達(dá)量。和標(biāo)記定量技術(shù)不同在于:標(biāo)記定量樣品預(yù)先混合并同時(shí)進(jìn)行LC-MS/MS檢測,而LFQ技術(shù)要求每個(gè)樣品獨(dú)立進(jìn)行制備和LC-MS/MS檢測,因此準(zhǔn)確性和通量弱于標(biāo)記定量技術(shù)。

圖1. Label-free定量技術(shù)原理。
 

技術(shù)優(yōu)勢
• LFQ定量技術(shù)克服了同位素標(biāo)記定量技術(shù)的諸多限制,更加靈活,適用于各種樣品;更高的靈敏度,定量更多的蛋白。
• 特異性與靈敏度兼?zhèn)洌夯谫|(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)精確到單個(gè)氨基酸位點(diǎn),蛋白鑒定準(zhǔn)確,靈敏度高,是profiling分析和PTM研究的強(qiáng)大工具。
• 嚴(yán)格的質(zhì)量控制:數(shù)據(jù)穩(wěn)定、重現(xiàn)性好,定量動(dòng)態(tài)范圍廣,多個(gè)樣品平行處理,接近標(biāo)記定量的定量準(zhǔn)確性。
• 專業(yè)的數(shù)據(jù)分析:標(biāo)準(zhǔn)的搜庫流程,專業(yè)的統(tǒng)計(jì)和生信分析,出版級的圖表展示,完整全面的分析報(bào)告。

樣品要求

樣品類型

樣品要求

蛋白質(zhì)提取物

濃度 >1μg/μl,蛋白質(zhì)總量 >200μg

細(xì)胞樣品

細(xì)胞量 >5×106

組織樣品

動(dòng)物、微生物組織濕重 >100mg

體液樣品

血液體積 >500μl,血清、血漿、腦脊液 >500μl,尿液 >50ml


技術(shù)流程

應(yīng)用領(lǐng)域
• 疾病標(biāo)志物篩選
• 分子機(jī)制研究
• 藥物作用靶點(diǎn)研究
• 特殊功能蛋白質(zhì)篩選

儀器平臺(tái)
Thermo Scientific EASY-nLC  1200
Thermo Scientific Q Exactive
 
 
 
上?党缮锕こ逃邢薰 
地址:上海市漕河涇高新技術(shù)開發(fā)區(qū)虹漕路421號(hào)63號(hào)樓2樓 
免費(fèi)熱線:800-820-5058;400-886-5058
電話:021-64451989         傳真:021-64452021
網(wǎng)址:www.kangchen.com.cn
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