凍存保種

 隨著轉(zhuǎn)基因、基因敲除、基因敲入、人源化和其他基因修飾動(dòng)物的大量制作和使用，保存這些重要的動(dòng)物模型需要大量的人力、財(cái)力和空間投入�！　±鋬霰４婕夹g(shù)的出現(xiàn)，為科學(xué)研究者提供了不必花費(fèi)昂貴代價(jià)維持動(dòng)物模型核心種群的方法。冷凍保存技術(shù)還有其他許多優(yōu)點(diǎn)，如可以避免珍貴的動(dòng)物模型受到微生物污染；避免受到火災(zāi)、洪水和地震等自然災(zāi)害毀滅性的打擊；更重要的是對(duì)于某些品系，可以防止伴隨動(dòng)物代數(shù)增加出現(xiàn)的基因停止或改變表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn)。與活動(dòng)物的國(guó)際運(yùn)輸相比，運(yùn)輸凍存的精子、胚胎或卵巢的成本和風(fēng)險(xiǎn)更低。
　　目前，配子凍存以精子和胚胎為主，部分凍存卵巢或卵子，因?yàn)槁炎咏鈨龊髲?fù)蘇效率還比較低。維通達(dá)通過(guò)凍存精子，胚胎或卵巢組織，可以確�？蛻舴N質(zhì)資源的安全。一旦客戶需要使用凍存的種質(zhì)資源，最快可以4~6周獲得冷凍保存的動(dòng)物資源。
服務(wù)內(nèi)容和流程：
（1）精子凍存
　　精子凍存在保種服務(wù)中廣泛應(yīng)用，其優(yōu)勢(shì)在于技術(shù)成熟，成本低，容易操作等特點(diǎn)。通過(guò)無(wú)菌手術(shù)分離可育雄鼠的附睪，在特定的溶液進(jìn)行精子的游離，采集邊緣活力最好的精子，并加入專用的冷凍保護(hù)液，通過(guò)麥管冷凍保存在液氮中。
建議每個(gè)品系提供至少3只12周至4月齡的可育成年小鼠或大鼠，凍存20支麥管的精液。
（2）胚胎凍存
　　胚胎凍存是最早的和最安全的保存實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系的方法。影響胚胎冷凍保存成功的三個(gè)重要方面包括：
　�、倥咛サ臄�(shù)量；
　　②復(fù)蘇后存活胚胎的數(shù)量；
③胚胎移植后存活的成年動(dòng)物數(shù)量。
　　 建議每個(gè)品系凍存約300枚2cell胚胎，每管20~30枚胚胎，放入液氮中保存。胚胎的來(lái)源，既可以通過(guò)超數(shù)排卵的方法，或者通過(guò)體外受精（IVF）的方法獲得。當(dāng)然，也可以與品系凈化結(jié)合起來(lái)，這樣可以節(jié)約胚胎準(zhǔn)備的成本。
該技術(shù)的流程包括：
　　①胚胎采集。建議凍存2-cell胚胎。
　�、谂咛デ逑础Ｎ覀儾捎脟�(guó)際胚胎移植協(xié)會(huì)的建議方案進(jìn)行清洗，目的是防止胚胎被微生物污染。
　　③胚胎凍存。采用玻璃化冷凍進(jìn)行，經(jīng)凍存液按照標(biāo)準(zhǔn)的程序處理后，投入液氮保存。
　�、軓�(fù)蘇驗(yàn)證。凍存一周后，取出1支驗(yàn)證管的胚胎進(jìn)行復(fù)蘇，囊胚發(fā)育率大于50%，或胚胎移植后有小鼠出生，表明胚胎冷凍保存成功。
　�、蓍L(zhǎng)期保存。驗(yàn)證保存成功的品系，放入專用的胚胎保存液氮罐中長(zhǎng)期保存。