RNA pull down技術(shù)服務

先將體外轉(zhuǎn)錄的RNA結(jié)合到Beads上，再將RNA-Beads和細胞裂解液孵育，這樣與目標RNA結(jié)合的蛋白便會一起吸附在Beads上。洗滌掉不結(jié)合的蛋白后，用洗脫液將RNA-protein復合物從Beads洗脫下來，之后可以采用Western Blot技術(shù)檢測特定的結(jié)合蛋白，還可以采用質(zhì)譜方法鑒定與目標RNA結(jié)合的未知蛋白。

RNA結(jié)合蛋白（RNA binding protein，RBP）是一類功能強大而廣泛的調(diào)節(jié)因子，約占細胞編碼的所有蛋白的5%~10%。目前除了少數(shù)RNA以核酶形式單獨發(fā)揮功能，大部分RNA通過與蛋白結(jié)合形成RNA-蛋白復合物來發(fā)揮作用。  

一方面，RBP參與RNA合成、可變剪接、修飾、轉(zhuǎn)運、翻譯及胞內(nèi)定位等多個轉(zhuǎn)錄后調(diào)控過程，調(diào)控mRNA穩(wěn)定性、lncRNA活性、miRNA沉默復合體形成等生物學過程；另一方面，RNA也會調(diào)節(jié)這些蛋白質(zhì)的活性、定位或與其他蛋白質(zhì)相互作用，從而影響RBP介導的各種細胞事件。RNA與蛋白質(zhì)的相互作用對于維持細胞穩(wěn)態(tài)是非常重要的，干擾這種相互作用將會導致細胞功能失調(diào)和相關(guān)疾病的發(fā)生。  

目前研究RNA-蛋白質(zhì)相互作用的方法分為兩大類：一是以感興趣的RNA為中心，尋找與該RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)；二是以感興趣的蛋白質(zhì)為中心，尋找與該蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA。RNA pull down屬于前者，通過體外轉(zhuǎn)錄的方式將感興趣的RNA帶上標簽，通過該標簽使RNA結(jié)合到樹脂支持物上，再加入樣本蛋白質(zhì)與RNA結(jié)合，洗滌、洗脫得到與目標RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。

研究者們通過大量臨床樣本的檢測發(fā)現(xiàn)，一個長鏈非編碼RNA(LncRNA)“LAMP5-AS1”在混合系白血病(MLL)中高表達，因此進一步探索了LAMP5-AS1在MLL白血病發(fā)生發(fā)展中的作用。

lncRNA LAMP5-AS1在MLL白血病細胞的自我更新過程和分化阻滯中起著重要的作用。LAMP5-AS1對維持DOT1L酶在MLL白血病中的高活性具有重要意義，可能成為治療MLL白血病的一個有價值的靶點。

Wang W.T. et al: The lncRNA LAMP5-AS1 drives leukemia cell stemness by directly modulating DOT1L methyltransferase activity in MLL leukemia. Journal of Hematology & Oncology. 2020. (IF=17.388)