抗體定制服務(wù)

抗體標(biāo)記主要是用于抗原的定位分析，在某些情況下，也可以對(duì)混雜有大量其他分子的樣本中的抗原進(jìn)行定量檢測(cè)。由于抗體與其相應(yīng)抗原具有很高的親和力，因此帶有易識(shí)別標(biāo)記物的抗體可以定位分析抗原，并且是一種理想的快速價(jià)廉的定量測(cè)定方法。
 
那么常見(jiàn)的抗體標(biāo)記方法有哪些呢？
和所有蛋白質(zhì)一樣，抗體也是由氨基酸組成的。理論上，通過(guò)大多數(shù)氨基酸可以實(shí)現(xiàn)生物偶聯(lián)。以下內(nèi)容介紹了幾種基于賴氨酸殘基的抗體偶聯(lián)和標(biāo)記技術(shù)。
 
①NHS（琥珀酰亞胺）酯法
應(yīng)用廣泛的熒光染料（如羅丹明衍生物）是采用這種方法對(duì)抗體進(jìn)行偶聯(lián)。通常在磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行，隨后與未標(biāo)記的染料在柱上進(jìn)行分離。該方法的主要缺點(diǎn)是，由于酯類對(duì)水分敏感，酯類的穩(wěn)定性差。因此，反應(yīng)結(jié)束后，標(biāo)記抗體應(yīng)立即使用。
 
②吉妥珠單抗（Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg®）是全球范圍內(nèi)首個(gè)獲批上市的抗體偶聯(lián)藥物（ADC）。半合成的卡奇霉素衍生物具有NHS酯，以便將卡奇霉素與人源化IgG4的賴氨酸殘基偶聯(lián)。然而，由于患者的臨床獲益不足，Mylotarg®已于2010年退市。
 
③異硫氰酸鹽法
這種方法主要用于異硫氰酸熒光素（FITC）染料的偶聯(lián)，廣泛用于熒光標(biāo)記蛋白和抗體的制備。異硫氰酸鹽比NHS更穩(wěn)定，但也更難制備，而且利用該方法，標(biāo)記的反應(yīng)效率可能會(huì)降低。與NHS法一樣，應(yīng)在反應(yīng)結(jié)束后通過(guò)層析法去除多余染料。
 
④碳二亞胺法
碳二亞胺衍生化合物將蛋白質(zhì)上的羧基轉(zhuǎn)換為反應(yīng)中間體，可與賴氨酸發(fā)生反應(yīng)。碳二亞胺的高反應(yīng)性意味著它們可用于使用相對(duì)惰性的材料（如磁性或金顆粒）標(biāo)記抗體。最常用的碳二亞胺為EDC。NHS有時(shí)可被添加至反應(yīng)中，以輔助產(chǎn)生相對(duì)穩(wěn)定的中間體。
 
該方法操作簡(jiǎn)單，但與NHS一樣，EDS具有吸水性，因此，標(biāo)記后抗體需立即使用。
 
⑤高碘酸鹽法
這種方法可用于制備特異性的HRP標(biāo)記抗體。高碘酸鹽通過(guò)產(chǎn)生與賴氨酸殘基相互作用的醛分子來(lái)激活HRP。HRP本身只有少量的賴氨酸殘基，因此酶聚合的影響不大。HRP和抗體之間的鍵是可逆的，可通過(guò)添加氰基硼氫化鈉使其保持穩(wěn)定。
 
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