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MTT實驗技術服務.
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一、MTT實驗技術服務（提供完整mtt實驗步驟，mtt實驗方法）
MTT方法簡介：
四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT方法），是通過快速簡便的顏色反應來檢測細胞存活數(shù)量。其原理是MTT可作為哺乳類動物細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時，線粒體內(nèi)琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍紫色的針狀甲月替（Formazan）結(jié)晶并沉積在細胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜（DMSO）溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其吸光度OD值，OD值的高低可間接反映活細胞的數(shù)量及其活性。
目前MTT法常用于以下幾個方面的研究：
1、檢測細胞活性：常作為細胞毒性試驗的一種方法。
2、體外藥物敏感實驗：該方法簡便、經(jīng)濟、快速，重復性好，所需的細胞數(shù)較少，沒有放射性，目前廣泛的用于臨床前的抗癌藥物的篩選研究。
3、一些細胞因子活性的研究
主要實驗步驟如下：
1）將對數(shù)生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個／ml的細胞懸液，按1000-10000個細胞／孔接種于96孔板，每孔加100μl。
2）將平板置37℃、5％CO2濕度培養(yǎng)箱中24小時后，加入含有不同濃度受試樣本的培養(yǎng)液100μl，每個樣本不同濃度設平行的三個孔，對照組加不含樣本的培養(yǎng)液100μl，再放入培養(yǎng)箱中孵育24-72小時，
3）用快速翻板法倒掉培養(yǎng)液，每孔加入用無血清1640按5mg／ml新鮮配制的MTT溶液100μl，溫育4小時，使MTT還原為甲月替，再次倒掉上清液，每孔加DMSO（二甲基亞楓）200μl，用平板搖床搖勻后，使用酶標儀測定光密度值（OD）（參考波長450nm，檢測波長570nm），以溶劑對照處理細胞為對照組，按下述公式計算化合物對細胞的抑制率，并按中效方程計算半數(shù)抑制濃度IC50。
客戶方需提供：
樣本描述，相關的實驗設計內(nèi)容如作用時間和樣本濃度等。
公司方提供：
實驗結(jié)果IC50值。
實驗周期與費用：
實驗費用以樣本數(shù)和細胞株的種類數(shù)目為單位計算，實驗周期為20個工作日，公司將在材料和預付的實驗經(jīng)費全部到位的工作日后30個工作日之內(nèi)提交實驗結(jié)果。
MTT方法簡介：
四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT方法），是通過快速簡便的顏色反應來檢測細胞存活數(shù)量。其原理是MTT可作為哺乳類動物細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時，線粒體內(nèi)琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍紫色的針狀甲月替（Formazan）結(jié)晶并沉積在細胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜（DMSO）溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其吸光度OD值，OD值的高低可間接反映活細胞的數(shù)量及其活性。
目前MTT法常用于以下幾個方面的研究：
1、檢測細胞活性：常作為細胞毒性試驗的一種方法。
2、體外藥物敏感實驗：該方法簡便、經(jīng)濟、快速，重復性好，所需的細胞數(shù)較少，沒有放射性，目前廣泛的用于臨床前的抗癌藥物的篩選研究。
3、一些細胞因子活性的研究
主要實驗步驟如下：
1）將對數(shù)生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個／ml的細胞懸液，按1000-10000個細胞／孔接種于96孔板，每孔加100μl。
2）將平板置37℃、5％CO2濕度培養(yǎng)箱中24小時后，加入含有不同濃度受試樣本的培養(yǎng)液100μl，每個樣本不同濃度設平行的三個孔，對照組加不含樣本的培養(yǎng)液100μl，再放入培養(yǎng)箱中孵育24-72小時，
3）用快速翻板法倒掉培養(yǎng)液，每孔加入用無血清1640按5mg／ml新鮮配制的MTT溶液100μl，溫育4小時，使MTT還原為甲月替，再次倒掉上清液，每孔加DMSO（二甲基亞楓）200μl，用平板搖床搖勻后，使用酶標儀測定光密度值（OD）（參考波長450nm，檢測波長570nm），以溶劑對照處理細胞為對照組，按下述公式計算化合物對細胞的抑制率，并按中效方程計算半數(shù)抑制濃度IC50。
客戶方需提供：
樣本描述，相關的實驗設計內(nèi)容如作用時間和樣本濃度等。
公司方提供：
實驗結(jié)果IC50值。
實驗周期與費用：
實驗費用以樣本數(shù)和細胞株的種類數(shù)目為單位計算，實驗周期為20個工作日，公司將在材料和預付的實驗經(jīng)費全部到位的工作日后30個工作日之內(nèi)提交實驗結(jié)果。
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