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關(guān)鍵詞:細(xì)胞轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的建立
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理論支持:
1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
原理:將需轉(zhuǎn)移的DNA或RNA包裹于脂質(zhì)體,通過(guò)脂質(zhì)體與細(xì)胞膜的融合將DNA或RNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞內(nèi)。 因此,細(xì)胞膜通透性高的細(xì)胞,脂質(zhì)體復(fù)合物較易進(jìn)入,轉(zhuǎn)染效率較高;而有的細(xì)胞系本身就不容易被轉(zhuǎn)染。
2、電穿孔轉(zhuǎn)染
原理:電流能可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)。優(yōu)勢(shì):細(xì)胞范圍廣,無(wú)論懸浮細(xì)胞還是貼壁細(xì)胞,均能被有效轉(zhuǎn)染。缺點(diǎn):高電場(chǎng)強(qiáng)度會(huì)對(duì)細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷效應(yīng)。
目前本公司正在引進(jìn)更為先進(jìn)的電穿孔儀,能夠有效減輕對(duì)細(xì)胞的殺傷作用。
3、腺病毒感染
對(duì)于脂質(zhì)體和電穿孔都無(wú)法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,可采用腺病毒感染的方式進(jìn)行目的分子的導(dǎo)入。優(yōu)點(diǎn):感染效率高。缺點(diǎn):只能瞬時(shí)表達(dá)。
服務(wù)內(nèi)容:
一、確認(rèn)細(xì)胞對(duì)質(zhì)粒載體或腺病毒載體的轉(zhuǎn)染效率
二、轉(zhuǎn)染攜帶目的基因的質(zhì)粒載體,G418篩選(或流式細(xì)胞分選)后建立穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株
三、對(duì)攜帶目的基因的載體(質(zhì)粒載體或腺病毒載體)進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)