MEDUSA 96道移液器在磁珠法質(zhì)粒DNA提取中的應(yīng)用

1.  在96孔盤中按標(biāo)準(zhǔn)流程培養(yǎng)1.2ml細(xì)菌菌液到合適的濃度。（本實驗中，為驗證本方法對每個樣品的平行性，采用培養(yǎng)250ml菌液，然后用96 道移液槍轉(zhuǎn)移1ml到每個孔中）

2.  2,000 x g離心 5 分鐘收集細(xì)菌，倒棄培養(yǎng)液。

3.  用96 道移液槍轉(zhuǎn)移170ul Buffer P1/Rnase A至細(xì)菌沉淀團中。放置在振蕩儀上，1500-2000rpm振蕩 1-2 分鐘充分重懸細(xì)菌。

4.  用 96 道移液槍轉(zhuǎn)移 170ul Buffer P2 至細(xì)菌重懸液中。放置在振蕩儀上，300-600rpm振蕩混勻3 分鐘裂解細(xì)菌。

5.  用 96 道移液槍轉(zhuǎn)移 170ul Buffer N3 至細(xì)菌裂解液中。放置在振蕩儀上，300-600rpm振蕩混勻5 分鐘中和。

6.  放到離心機中。4000-4700g離心 15 分鐘沉淀去除雜質(zhì)。

7.  小心取出96 孔板， 放置在 96 道移液移液槍的平臺中。 調(diào)整好移移槍插入的深度， 吸取450ul上清液至新的96 孔反應(yīng)板中。(若沉淀較多，可只轉(zhuǎn)移 400ul)

8.  用 96 道移液槍加入 0.5 倍體積的磁珠結(jié)合液(Bind Beads)至樣品中。放置在振蕩儀上，1000-1200rpm振蕩混勻1 分鐘。室溫靜置 10 分鐘 (處理低拷貝數(shù)的質(zhì)粒2-8 ℃放置過夜) 。

9.  放置在磁力架上吸附磁珠5 分鐘。用 96 道移液槍吸棄廢液（吸取800ul以上）。

10. 用 96 道移液槍每孔加入600ul 70%乙醇至每一個孔中。放置在振蕩儀上 1000-1200rpm振蕩混勻1 分鐘。

11. 放置在磁力架上吸附磁珠3 分鐘。用 96 道移液槍吸棄廢液（吸取650ul以上）。

12. 用 96 道移液槍每孔加入200ul 70%乙醇。放置在振蕩儀上 1000-1200rpm振蕩混勻1 分鐘。

13. 放置在磁力架上吸附磁珠 3 分鐘。用 96 道移液槍吸棄廢液（吸取250ul以上）。

14. 室溫干燥20 分鐘。

15. 用 96 道移液槍每孔加入50-100ul滅菌水（Elution Buffer），放置在振蕩儀上 1200-2000rpm振蕩混勻2 分鐘。