慢病毒RNAi干擾服務(wù)

慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)，但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性，作為基因治療載體發(fā)展起來，最近已用于轉(zhuǎn)基因動物制備。利用慢病毒構(gòu)建的shRNA/miRNA載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的shRNA相比，一方面可以擴(kuò)增替代瞬時(shí)表達(dá)載體使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞，并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組，進(jìn)行長時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)。

（1）服務(wù)流程
1）含目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構(gòu)建和純化提取。
2）慢病毒干擾載體、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。
3）培養(yǎng)48~72h，收集培養(yǎng)上清。
4）病毒的純化和濃縮（超離和/或超濾）。
5）滴度測定、目的基因檢定。
6）將制得的慢病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)客戶的靶細(xì)胞，篩選混合穩(wěn)定細(xì)胞株，并檢測靶基因的表達(dá)。

（2）客戶提供
1）表達(dá)miRNA/shRNA的質(zhì)粒（提供測序圖譜）或所要干擾的靶基因的名稱、序列
2）所需要的病毒滴度及總量，病毒是否需要純化
3）若需要檢測靶基因的表達(dá)變化，如需要請?zhí)峁┫鄳?yīng)的抗體

（3）我們提供
1）提供重組后的慢病毒載體質(zhì)粒
2）提供已測定好滴度、可以直接進(jìn)行后續(xù)分析的慢病毒儲存液