在RNAi研究中,測定敲除效率時(shí),通過轉(zhuǎn)染控制的最適化,可以獲得高敲除效果。因此,為了將RNAi研究成功導(dǎo)入,需要對(duì)客戶希望的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率的最適化工作
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在RNAi研究中,測定敲除效率時(shí),通過轉(zhuǎn)染控制的最適化,可以獲得高敲除效果。因此,為了將RNAi研究成功導(dǎo)入,需要對(duì)客戶希望的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率的最適化工作。
(1)服務(wù)流程
1)對(duì)需要用于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng);
2)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件:在熒光顯微鏡下檢測Fluorescent Oligo或可表達(dá)GFP的干擾載體的熒光強(qiáng)度,評(píng)估轉(zhuǎn)染效率
3)為靶基因設(shè)計(jì)一組siRNA雙鏈或干擾載體
4)采用熒光定量RT-PCR或免疫蛋白印跡評(píng)估轉(zhuǎn)染后某一時(shí)間點(diǎn)靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化
5)可利用抗生素來篩選穩(wěn)定表達(dá)shRNA或miRNA的細(xì)胞株
(2)您需要提供:
1)選擇的細(xì)胞系和詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟
2)選擇的靶基因cDNA的序列號(hào)
3)抗體(如果需要Western blot檢測)
(3)我們提供:
1)轉(zhuǎn)染效率分析
2)Knockdown分析,包括熒光定量PCR檢測報(bào)告、Western Blot圖片等